洛陽、昆明兩地獻血者人群HBV基因型的分子流行病學研究.pdf

1、目的：
　　 在本實驗室建立多對型特異性引物套式PCR對HBV進行基因分型的方法，并應用多對型特異性引物套式PCR法對昆明、洛陽兩地獻血者乙肝表面抗原(HBsAg)篩查陽性標本進行基因分型，了解昆明、洛陽兩地獻血者人群HBV基因型的分布情況；調(diào)查昆明、洛陽兩地僅谷丙轉氨酶(ALT)單項陽性及各項血液檢驗均陰性的合格血液樣本中，乙肝表面抗原陰性、核酸檢測陽性樣本的比率，并對核酸檢測陽性的樣本進行序列分析。
　　 方法：

2、r>　　 1.參照文獻[7]根據(jù)HBV前s1基因和s基因區(qū)域內(nèi)的保守序列設計出十條引物，其中兩條外引物，8條內(nèi)引物，并將8條內(nèi)引物分為A、B兩組，分別擴增對應于A、B、C和D、E、F型的HBV DNA片斷。優(yōu)化兩輪PCR的擴增條件，將得到的第2輪PCR產(chǎn)物進行瓊脂糖電泳，根據(jù)PCR產(chǎn)物片斷大小判定其基因型。分型結果以s基因直接測序法加以驗證。分別收集昆明、洛陽的獻血者(HBsAg)檢測陽性標本279份和88份，采用多對型特異性引物套式

3、PCR的方法對血漿中的HBV進行基因分型。
　　 2.對昆明、洛陽兩地僅ALT單項陽性血及合格血中HBV核酸檢測陽性樣本的病毒DNA大s區(qū)進行PCR擴增，對擴增產(chǎn)物進行測序及序列分析。
　　 結果：
　　 1.經(jīng)條件優(yōu)化建立了多對型特異性引物套式PCR法對HBV進行基因分型的擴增體系和擴增條件。經(jīng)s基因測序法驗證該分型方法準確可靠。
　　 2.洛陽88份標本中，用型特異性引物法成功分型72例，分型成功率8

4、1.8％。其中B型10例(13.9％)；C型46例(63.9％)；B、C混合型16例(22.2％)。昆明279份標本中成功分型214例，分型成功率76.7％。其中B型69例(32.2％)；C型103例(48.1％)；B、C混合型41例(19.2％)；D型1例(0.5％)。
　　 3.在昆明、洛陽兩地的合格血中，HBsAg陰性核酸檢測陽性樣本的檢出率都為0；僅ALT單項陽性血中的HBsAg陰性核酸檢測陽性樣本檢出率都為0.1％。<

5、br>　　 4.兩例表面抗原陰性核酸檢測陽性標本均無任何血清學標志物，基因型分別為C和C/D重組型， S基因區(qū)存在核苷酸突變。
　　 結論：
　　 1.型特異性引物法能夠準確的對HBV進行基因分型，方法簡明，可靠。洛陽和昆明地區(qū)獻血者中HBV攜帶者都以C型為主，并有一定比例的B型和B、C混合型，昆明地區(qū)發(fā)現(xiàn)一例D型，未見A、E、F基因型。
　　 2.我國獻血者中有一定比例的隱性乙型肝炎感染者存在，并初步掌握了其