AQP1的表達(dá)對(duì)Balb-c 3T3成纖維細(xì)胞自噬的影響.pdf

1、目的：
　　水通道蛋白(Aquaporin)是廣泛分布于動(dòng)物、植物、微生物內(nèi)具有調(diào)節(jié)水跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)作用的通道。近年來有研究顯示水通道蛋白除轉(zhuǎn)運(yùn)水以外，尚可作為O2、CO2、NO等通過細(xì)胞膜的通道，并可受到滲透壓、低氧、能量代謝等多種因素的調(diào)節(jié)。本研究應(yīng)用特異性靶向干擾水通道亞型水通道蛋白1(AQP1)表達(dá)基因的siRNA（short interfering RNA），抑制Balb/c3T3成纖維細(xì)胞的AQP1表達(dá)，并通過檢測(cè)碘乙酰胺(

2、iodoacetamide，IA)對(duì)這種AQP1表達(dá)受抑制的細(xì)胞所造成的自噬標(biāo)記物(LC3)表達(dá)量的變化，初步探討AQP1與細(xì)胞自噬之間的關(guān)系。
　　方法：
　　1、利用siRNA轉(zhuǎn)染技術(shù)阻斷Balb/c3T3成纖維細(xì)胞中AQP1的表達(dá)，應(yīng)用Western-Blot法檢測(cè)AQP1表達(dá)量的變化。
　　2、利用siRNA轉(zhuǎn)染技術(shù)阻斷Balb/c3T3成纖維細(xì)胞中AQP1的表達(dá)，再使用碘乙酰胺造成細(xì)胞能量缺乏，模擬細(xì)胞內(nèi)低氧

3、環(huán)境，Western-Blot檢測(cè)自噬標(biāo)記物L(fēng)C3表達(dá)量的變化。
　　結(jié)果：
　　1、利用siRNA轉(zhuǎn)染技術(shù)阻斷Balb/c3T3成纖維細(xì)胞中AQP1的表達(dá)，應(yīng)用Western-Blot法驗(yàn)證，結(jié)果表明，AQP1-siRNA組AQP1表達(dá)較未處理細(xì)胞組減少92.86％，較Non-Targeting siRNA組減少90.68％。
　　2、抑制Balb/c3T3成纖維細(xì)胞AQP1基因，應(yīng)用30nM IA刺激細(xì)胞，造成細(xì)胞

4、能量缺乏，模擬低氧環(huán)境。4小時(shí)后顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)可見細(xì)胞明顯變圓、皺縮，此時(shí)檢測(cè)自噬標(biāo)記物L(fēng)C3-Ⅱ表達(dá)顯著上調(diào)，與對(duì)照組相比增加了50.49％;6小時(shí)候細(xì)胞大量死亡，同時(shí)檢測(cè)LC3-Ⅱ的表達(dá)情況，與4小時(shí)比略有下降，與對(duì)照組相比增加了36.50％。
　　討論：
　　細(xì)胞AQP1功能受阻后，會(huì)造成細(xì)胞內(nèi)ROS的蓄積，ROS如果得不到清除就會(huì)攻擊細(xì)胞的蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、DNA等生物大分子，導(dǎo)致一系列氧化損傷，因此細(xì)胞激活自噬活