雷公藤內(nèi)酯醇對AD模型大鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、目的:
　　 凋亡介導(dǎo)準(zhǔn)確的、程序性的神經(jīng)細(xì)胞自然死亡,是中樞神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育過程中神經(jīng)細(xì)胞發(fā)生的重要生理過程。然而,過早凋亡和/或凋亡的調(diào)控失常與神經(jīng)退行性變的發(fā)病機(jī)制有關(guān),可導(dǎo)致各種慢性疾病發(fā)生,如阿爾茨海默病(AD)。β淀粉樣蛋白(Aβ)的代謝異常和沉積是AD發(fā)生和發(fā)展的關(guān)鍵性因素。離體和在體實(shí)驗(yàn)表明Aβ與神經(jīng)細(xì)胞凋亡關(guān)系密切,Aβ可誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞凋亡。神經(jīng)細(xì)胞凋亡被認(rèn)為是AD中神經(jīng)元大量丟失的主要因?yàn)橹?。因?減輕Aβ誘導(dǎo)的

2、神經(jīng)細(xì)胞凋亡可改善AD的預(yù)后。最近的研究發(fā)現(xiàn)雷公藤內(nèi)酯醇(TP)可通過抗炎和免疫抑制作用,減輕Aβ所致AD模型大鼠腦內(nèi)的免疫炎癥反應(yīng),改善AD大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。本實(shí)驗(yàn)通過研究TP對Aβ1-40所致AD模型大鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞凋亡及其相關(guān)蛋白表達(dá)的影響,為進(jìn)一步闡明TP對AD模型大鼠神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)性作用及機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法:
　　 1.健康雄性SD大鼠隨機(jī)分為對照組、模型組及用藥組。模型組給以雙側(cè)海馬各一次性注射凝

3、聚態(tài)Aβ1-40,Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)判斷模型成功與否。對照組大鼠雙側(cè)海馬注射等量生理鹽水。用藥組大鼠在模型制作成功后每日腹腔注射TPO.4mg/kg,共15d。
　　 2.采用甲苯胺藍(lán)染色觀察各組實(shí)驗(yàn)動物注射點(diǎn)附近海馬結(jié)構(gòu)變化。
　　 3.采用流式細(xì)胞儀檢測各組實(shí)驗(yàn)動物海馬神經(jīng)細(xì)胞凋亡率的變化。
　　 4.采用TUNEL染色檢測各組實(shí)驗(yàn)動物海馬神經(jīng)細(xì)胞凋亡數(shù)的變化。
　　 5.采用透射電鏡技術(shù)觀察各組

4、實(shí)驗(yàn)動物海馬神經(jīng)細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的凋亡相關(guān)變化。
　　 6.采用免疫組織化學(xué)染色檢測各組實(shí)驗(yàn)動物海馬神經(jīng)細(xì)胞細(xì)胞色素c及Bcl-2蛋白表達(dá)的變化。
　　 結(jié)果:
　　 1.甲苯胺藍(lán)染色結(jié)果顯示,對照組大鼠海馬結(jié)構(gòu)未見明顯異常,模型組大鼠海馬注射點(diǎn)附近神經(jīng)元大量丟失,神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞浸潤。用藥組海馬神經(jīng)元損傷減輕。
　　 2.流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果顯示,模型組海馬神經(jīng)細(xì)胞凋亡率明顯高于對照組(P<0.01),用藥組海馬

5、神經(jīng)細(xì)胞凋亡率較模型組明顯減少(P<0.01)。
　　 3.TUNEL染色結(jié)果顯示,模型組大鼠海馬陽性細(xì)胞數(shù)明顯高于對照組(P<0.01),用藥組海馬陽性細(xì)胞數(shù)較模型組明顯減少(P<0.01)。
　　 4.電鏡結(jié)果顯示:對照組大鼠海馬神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)大致正常；模型組海馬神經(jīng)元核內(nèi)染色質(zhì)分布不均,向核膜邊集,形成不規(guī)則的高電子密度團(tuán)塊,呈現(xiàn)早期凋亡征象；用藥組大鼠海馬神經(jīng)元核內(nèi)染色質(zhì)邊聚不明顯。
　　 5.細(xì)胞色素c

6、免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示,模型組海馬細(xì)胞色素c陽性產(chǎn)物數(shù)和平均光密度明顯高于對照組(P<0.01),用藥組海馬細(xì)胞色素c陽性產(chǎn)物數(shù)和平均光密度較模型組明顯減少(P<0.01)。
　　 6.Bcl-2免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示,模型組海馬Bcl-2陽性細(xì)胞數(shù)和平均光密度明顯低于對照組(P<0.01),用藥組海馬Bcl-2陽性細(xì)胞數(shù)和平均光密度高于模型組(P<0.01)。
　　 結(jié)論:
　　 TP對AD模型大鼠海馬神經(jīng)