環(huán)孢素A、人參皂甙Rb1和三七皂甙R1對(duì)兩種肺高壓大鼠模型的治療作用.pdf

1、肺高壓(Pulmonary Hypertension,PH)發(fā)病的典型血管病變多由肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞(pulmonary aterial smooth muscle,PASMCs)內(nèi)Ca2+穩(wěn)態(tài)失衡所致。先前針對(duì)PH發(fā)病機(jī)制的研究表明,規(guī)范性瞬時(shí)感受器電位通道蛋白(Canonical transient receptor potential,TRPC)是鈣池操縱性鈣通(Store-Operated Calcium Channels,SOC

2、C)的分子基礎(chǔ),在慢性低氧(Chronic Hypoxia,CH)和野百合堿(monocrotaline,MCT)大鼠中肺動(dòng)脈TRPC表達(dá)上調(diào)、鈣池操縱性鈣內(nèi)流(Store-Operated Calciumentry,SOCE)增加。本研究采用野百合堿(monocrotaline,MCT)和慢性低氧(Chronic Hypoxemia,CH)分別誘發(fā)大鼠PH,同時(shí)將環(huán)孢素A(cyclosporin A,CosA)按25mg/kg劑量隔天

3、腹腔注射,正常飼養(yǎng)3w,建立CosA干預(yù)MCT和CH致肺動(dòng)脈高壓大鼠模型;另一方面,在MCT和CH模型基礎(chǔ)上,分別觀察傳統(tǒng)中藥人參皂甙Rb1(Ginsenoside Rb1)和三七皂甙R1(Notoginsenoside R1)對(duì)離體肺動(dòng)脈(pulmonaryarteries,PAs)的舒張作用。為PH的治療探尋新的靶向治療藥物。
　　第一部分，環(huán)孢素A對(duì)野百合堿和慢性低氧誘發(fā)肺高壓大鼠模型的治療作用
　　目的:觀察CosA

4、干預(yù)在MCT和CH大鼠PH的防治作用,及其作用機(jī)制,為藥物治療PH尋找新靶點(diǎn)。
　　方法:SD大鼠分別采用一次性腹腔注射(50mg/kg)MCT和CH兩種方式誘導(dǎo)PH的發(fā)生,同時(shí)將CosA按25mg/kg劑量隔天腹腔注射,正常飼養(yǎng)3w,建立CosA干預(yù)MCT和慢性低氧致PH大鼠模型;測(cè)定以下指標(biāo):①右心室收縮壓(right ventricular systolic pressure,RVSP)、平均右心室內(nèi)壓(mean right

5、 ventricular pressure,MRVP)、右心室重量指數(shù)(Right Ventricular Mass Index Predicts,RVMI);②環(huán)匹阿尼酸(cyclopiazonic acid ,CPA)和內(nèi)皮素-1(endothelin-1,ET-1)誘發(fā)肺動(dòng)脈(pulmonary arteries,PAs)收縮效應(yīng)量效曲線;,③釓離子(gadolinium,Gd3+)對(duì)ET-1誘發(fā)PAs收縮效應(yīng)的阻斷作用。

6、>　　結(jié)果:與MCT和CH組相比,CosA干預(yù)3w后,①大鼠RVSP、MRVP和RVMI顯著下降,HE染色可見(jiàn)肺小動(dòng)脈平滑肌層增生減弱,肺內(nèi)小動(dòng)脈管腔面積與截面積的比值明顯增加,肺內(nèi)小動(dòng)脈管壁厚度與其半徑的比值顯著降低,這表明CosA干預(yù)3w能預(yù)防MCT和CH誘發(fā)的PH、肺血管重塑以及右心室肥大;②MCT和CH組大鼠中CPA誘發(fā)的PAs收縮顯著下降(P<0.01),表明CosA干預(yù)下調(diào)了SOCE(Store-operatedCa2+en

7、try,SOCE)功能;③MCT和CH組大鼠中ET-1誘發(fā)PAs收縮的量效曲線明顯右移,表明CosA干預(yù)降低了大鼠PAs對(duì)ET-1的敏感性。④Gd3+對(duì)10nMET-1誘發(fā)PAs收縮效應(yīng)的阻斷作用減弱,這亦表明CosA干預(yù)下調(diào)了SOCE功能。
　　結(jié)論:CosA干預(yù)MCT和CH致PH大鼠模型3w,可預(yù)防MCT和CH誘發(fā)的PH、肺血管增生、右心室肥大,抑制MCT和CH大鼠肺動(dòng)脈中SOCE增強(qiáng)介導(dǎo)的肺動(dòng)脈收縮張力增強(qiáng),降低ET-1的高

8、反應(yīng)性。
　　第二部分，人參皂甙Rb1和三七皂甙R1對(duì)野百合堿和慢性低氧誘發(fā)肺高壓大鼠模型肺動(dòng)脈的舒張作用
　　目的:分別在MCT和CH誘導(dǎo)大鼠PH模型上,觀察傳統(tǒng)中藥人參皂甙Rb1和三七皂甙R1對(duì)PAs張力的調(diào)節(jié)作用,從而為PH治療提供新的靶點(diǎn)。
　　方法:SD大鼠分別采用一次性腹腔注射(50mg/kg)MCT和慢性低氧兩種方式誘導(dǎo)PH的發(fā)生(10％O2,正常飼養(yǎng)3w)建立MCT和CH致PH大鼠模型;測(cè)定以下指標(biāo):①

9、RVSP、MRVP、RVMI;②人參皂甙Rb1和三七皂甙R1對(duì)CPA預(yù)收縮PH模型大鼠PAs的舒張作用;③人參皂甙Rb1和三七皂甙R1對(duì)ET-1預(yù)收縮PH模型大鼠PAs的舒張作用及機(jī)制。
　　結(jié)果:①不同劑量人參皂甙Rb1和三七皂甙R1(0.1~100μM)對(duì)10nMET-1預(yù)收縮正常大鼠肺動(dòng)脈血管環(huán)效應(yīng)的劑量依賴性舒張作用(Rb1:Emax為36.5±12.3%,EC50=5.93±0.15μM,n=7,P<0.01;R1:Em

10、ax為32.5±16.3%,EC50=5.25±0.14μM,n=8,P<0.01)。②在3μM硝苯地平(nifedipine,Nif)預(yù)處理情況下:6μM人參皂甙Rb1/三七皂甙R1預(yù)處理對(duì)10nMET-1引起MCT大鼠PAs收縮效應(yīng)均有阻斷作用(Rb1:P﹤0.05,n=22;R1:P﹤0.05,n=22);6μM人參皂甙Rb1/三七皂甙R1對(duì)10nMET-1預(yù)收縮CH大鼠PAs效應(yīng)均有明顯的抑制作用(Rb1抑制率:49.8±7.4

11、%,n=14,P<0.01;R1抑制率:35.8±17.4%,n=14,P<0.01);這都提示了人參皂甙Rb1和三七皂甙R1可通過(guò)阻斷非電壓依賴性Ca2+通道介導(dǎo)的鈣內(nèi)流,對(duì)PAs產(chǎn)生舒張作用。③6μM人參皂甙Rb1/三七皂甙R1對(duì)10μMCPA預(yù)收縮兩種PH模型大鼠PAs收縮效應(yīng)均有阻斷作用(Rb1:CH組抑制率45.1±18.1%,n=9,MCT組抑制率44.0±11.4%%,n=14;R1:CH組抑制率39.6±17.0%,n=

12、7,MCT組抑制率40.9±11.2,n=14),提示人參皂甙Rb1和三七皂甙R1均可通過(guò)部分阻斷SOCE,舒張肺動(dòng)脈血管。④在3μMNif預(yù)處理情況下,3nMGd3+阻斷10nMET-1預(yù)收縮兩種肺動(dòng)脈高壓模型大鼠肺動(dòng)脈血管環(huán)效應(yīng)后,再加入6μMRb1/R1無(wú)進(jìn)一步明顯的阻斷作用(n=15),提示人參皂甙Rb1和三七皂甙R1舒張PAs的作用主要通過(guò)部分阻斷SOCE。
　　結(jié)論:人參皂甙Rb1和三七皂甙R1能部分阻斷PAs上SOC