新型醫(yī)用無鎳不銹鋼(BIOSSN4)的生物相容性評價—體外細胞毒性實驗.pdf

1、目的：
　　 本實驗用新型醫(yī)用無鎳不銹鋼BIOSSN4浸提液培養(yǎng)小鼠L929成纖維細胞，通過MTT法檢測細胞增殖活力并計算相對增殖率，從而對這種合金的生物相容性進初步檢測，并與傳統(tǒng)使用的醫(yī)用316L不銹鋼，金合金的生物相容性進行比較和評價，為該材料的臨床應用提供生物學依據(jù)。
　　 方法：
　　 一、實驗材料
　　 將實驗試樣分為：A組：BIOSSN4不銹鋼，B組：316L不銹鋼，C組：金合金，D組：鉛。將

2、A-D組材料分別制成半徑5mm、厚lmm的圓形蠟片，根據(jù)不同合金的要求鑄造形成圓形金屬片，打磨拋光后超聲清洗15min；去離子水沖洗數(shù)遍后置于玻璃小瓶中，將金屬片于121℃高壓滅菌后待用。無菌下，將A-D組試樣分別在超凈工作臺中，按浸液與試樣表面積之比為0.55ml/cm2的比例加入RPMI1640培養(yǎng)液，置于37℃，95％濕度，5％CO2培養(yǎng)箱中浸提72小時，即得到材料浸提液。
　　 二、實驗方法
　　 取96孔培養(yǎng)板

3、，每孔加入細胞懸液100ul。在1-4組孔中分別加入A-D組材料浸提液100 μl，在第5組孔內(nèi)加入即RPMI1640培養(yǎng)液1001μl后，放入培養(yǎng)中培養(yǎng)。分別于培養(yǎng)后的1-3天各取一塊培養(yǎng)板，在倒置相差顯微鏡下觀察活胞的形態(tài)。在每孔中加入5mg/ml的MTT 液20μl，繼續(xù)培養(yǎng)4小時后取出。吸培養(yǎng)液，在每孔中加入DMS0150μl，用自動酶標儀檢測吸光度值。將各組的吸度值作單因素方差分析和均數(shù)間兩兩比較的統(tǒng)計學分析。計算各組的細胞相

4、對增殖率（RGR）并作細胞毒性級評定。
　　 結(jié)果：
　　 一、細胞的形態(tài)學觀察
　　 培養(yǎng)24小時，陽性對照組中貼壁生長的細呈梭形或多角形，懸浮的細胞呈圓形或不規(guī)則形，胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)空泡及顆粒狀物。其余各組的細胞幾乎全部貼壁生長，形態(tài)正常，胞質(zhì)均勻。培養(yǎng)72小時，陽性對照組中的細胞大部分脫落，胞質(zhì)，胞核濃縮，甚至可見許多質(zhì)膜崩解，核破裂的死亡細胞。其余各組細胞大部分繼續(xù)貼壁生長，細胞密度增加，可見散的懸浮的退化細胞

5、及個別的死亡細胞。
　　 二、統(tǒng)計學處理結(jié)果
　　 金屬材料組及陰性對照組與陽性對照組之間的光度值的差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05或P<0.01）。三種金屬材料組的細胞相對增殖率由大到小的順序依次為：金合金，BIOSSN4無鎳不銹鋼，316L不銹鋼。BIOSSN4無鎳不銹鋼，金合金對細胞均有極輕微的毒性，316L不銹鋼對細胞表現(xiàn)出1級細胞毒性，但統(tǒng)計學分析結(jié)果顯示：三種金屬材料組與陰性對照組的吸光度值之間的差均無統(tǒng)計學