抑制PLC-γ1能促進人骨性關節(jié)炎軟骨細胞外基質(zhì)的合成.pdf

1、目的：旨在探討磷脂酶C-γ1（phospholipase C-γ1）在人骨性關節(jié)炎(osteoarthritis,OA)疾病發(fā)展過程中的作用。
　　方法：本研究通過從手術廢棄材料中獲得正常膝關節(jié)及骨關節(jié)炎患者軟骨，分離出軟骨細胞，并進行細胞培養(yǎng)，應用蛋白免疫印跡（western blotting）技術，檢測正常與OA軟骨細胞中plc-γ1、磷酸化plcγ1及其下游分子（sox-9、mmp13)的差異；免疫組化方法檢測plcγ1在O

2、A與正常對照組之間表達差異；加入U73122（plcγ1抑制劑），檢測下游分子（sox-9 mmp13 Agg Col II）表達變化；設計并合成針對plcγ1的siRNA序列，轉(zhuǎn)染人OA軟骨細胞，干擾plcγ1的表達；最后使用DAG和IP3相應的抑制劑處理細胞，用western blotting技術檢測這些信號通路蛋白的表達水平。
　　結(jié)果：plcγ1在骨性關節(jié)炎患者的軟骨組織及軟骨細胞中的表達高于相應的正常對照組。Plcγ1與

3、OA患者軟骨細胞外基質(zhì)合成密切相關，進一步應用U73122（plcγ1抑制劑）或者siRNA技術降低plcγ1，均能促進OA患者軟骨細胞外基質(zhì)的合成；并且在調(diào)節(jié)基質(zhì)合成中，plcγ1下游的 IP3/Ca2+/CamK信號軸強于DAG/PKCδ軸，其可通過激活mTOR/P70S6K/S6，進而參與軟骨細胞外基質(zhì)的合成。
　　結(jié)論：plcγ1參與了OA患者軟骨細胞外基質(zhì)的合成，而且plcγ1水平的降低能夠促進軟骨細胞外基質(zhì)合成，plc