酶育牛黃與天然牛黃化學成分的比較研究.pdf

1、牛黃為牛的膽結(jié)石,是一種療效確實的名貴中藥材。主要化學成分有膽酸、去氧膽酸、鵝去氧膽酸、膽紅素等。具有清熱、豁痰、開竅、涼肝、息風、解毒功效。酶育牛黃是以新鮮牛膽汁為原料根據(jù)天然牛黃形成原理,采用酶法制備的牛黃。
　　 本項目建立了酶育牛黃與天然牛黃的指紋圖譜研究方法；對酶育牛黃和天然牛黃中的膽汁酸、膽紅素、膽固醇、微量元素等成分進行了系統(tǒng)比較研究。通過系統(tǒng)研究,對酶育牛黃與天然牛黃的一致性進行評價,為酶育牛黃的新藥開發(fā)和產(chǎn)品質(zhì)

2、量控制標準提供實驗依據(jù)和技術(shù)資料。課題研究主要內(nèi)容及結(jié)果如下:一、酶育牛黃與天然牛黃中二甲基亞砜提取成分的定性與定量比較研究
　　 建立了酶育牛黃與天然牛黃HPLC指紋圖譜,比較了兩種牛黃該類成分指紋圖譜的異同。10批酶育牛黃的HPLC指紋圖譜相似度較高,提示酶育牛黃的生產(chǎn)制備工藝較穩(wěn)定。但在天然牛黃的10個共有色譜峰中,酶育牛黃中可以檢測到5個色譜峰,其中多數(shù)色譜峰的信號強度低于天然牛黃,主要成分膽紅素含量酶育牛黃較天然牛黃低

3、,但酶育牛黃中也有一成分比天然牛黃高,表明酶育牛黃與天然牛黃二甲基亞砜提取成分的種類及含量存在一定差異。
　　 建立了膽紅素的HPLC含量測定方法,采用C18色譜柱,甲醇-氯仿-1％醋酸(65:32:3)流動相系統(tǒng),檢測波長450 nm,流速1.0 mL·min-1。酶育牛黃與天然牛黃中的含量分別為9.35μg·mg-1、45.32μg·mg-1,兩種牛黃中膽紅素的含量差異明顯。
　　 二、酶育牛黃與天然牛黃中膽汁酸類成

4、分的定性與定量比較研究
　　 建立了酶育牛黃與天然牛黃HPLC-ELSD指紋圖譜。采用中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)的操作規(guī)范(版本2004A)軟件分別對10批酶育牛黃與天然牛黃色譜圖進行分析,建立了天然牛黃色譜指紋圖譜共有模式,并與10批酶育牛黃的指紋圖譜進行了比較。10批酶育牛黃藥材指紋圖譜的相似度分別為0.980、0.991、0.979、0.990、0.984、0.992、0.983、0.989、0.991和0.983,表

5、明不同批次酶育牛黃的相似度較高,說明酶育牛黃生產(chǎn)制備工藝穩(wěn)定。10批酶育牛黃與天然牛黃共有模式色譜圖比較相似度較低,天然牛黃中膽酸類成分有8個共有色譜峰,酶育牛黃也檢出8個色譜峰,其中1、2、4、5、6色譜峰與天然牛黃膽酸類成分的共有色譜峰相同,但4、5號色譜峰的信號強度較弱；在酶育牛黃中未檢測到第3、7、8號色譜峰,但檢測到天然牛黃中未檢出的第9、10、11號色譜峰,表明酶育牛黃與天然牛黃的膽酸類成分存在一定差異。
　　 建立

6、了6種膽酸的HPLC-ELSD含量測定方法,并對兩種牛黃中的膽酸含量進行了比較。采用C18色譜柱,ELSD檢測器,甲醇和0.1％的醋酸水溶液梯度洗脫流動相系統(tǒng)。兩種牛黃各自3個批次之間的膽酸類成分及其含量一致,但兩種牛黃之間的膽酸類成分及含量存在差異。天然牛黃中檢測到膽酸、鵝去氧膽酸和去氧膽酸3種膽酸類成分；酶育牛黃中檢測到膽酸、鵝去氧膽酸和豬去氧膽酸3種膽酸類成分,即兩種牛黃均含有膽酸、鵝去氧膽酸二種共有成分,并各含有一種不同的膽酸類

7、成分,其各種膽酸類成分含量存在差異。
　　 三、酶育牛黃與天然牛黃中微量元素的比較研究
　　 采用火焰原子吸收光譜法和石墨爐原子吸收光譜法測定了牛黃中12種元素。酶育牛黃中的Cu、Zn、Fe、Mn、Ca、Mg、K、Na等8種元素與天然牛黃中的含量無明顯差異,Pb、Cr、Ni、Cd等重金屬含量與天然牛黃相比差異較小。通過對酶育牛黃與天然牛黃中微量元素的比較研究,為評價和開發(fā)利用酶育牛黃提供了實驗依據(jù)。
　　 四、酶

8、育牛黃與天然牛黃中膽固醇的定量比較研究
　　 建立了膽固醇的HPLC-ELSD測定法,采用C18色譜柱,ELSD檢測器,以乙腈和異丙醇(1:1)為流動相,測定了兩種牛黃中膽固醇的含量,三批天然牛黃中的含量分別為6.53μg·mg-1、5.69μg·mg-1、5.12μg·mg-1,三批酶育牛黃中的含量分別為2.78μg·mg-、2.34μg·mg-1、2.13μg·mg-1,天然牛黃中膽固醇含量高,提示可能與天然牛黃體內(nèi)成石機理