miR16對膠質(zhì)母細胞瘤U87細胞增殖影響的體外及體內(nèi)實驗研究.pdf

1、溫州醫(yī)科大學碩士學位論文論文題目：堡i＆：!魚型膣質(zhì)量細胞疽墮墨2細胞增殖髭響的馇之E丞馇凼塞驗嬰宜答辯委員會主席：王茂德答辯委員會成員：王茂德諸蔓庭劍鄭住明溫州醫(yī)科大學碩士學位論文miR一16對膠質(zhì)母細胞瘤U87細胞增殖影響的體外及體內(nèi)實驗研究中文摘要背景：腦膠質(zhì)瘤的傳統(tǒng)治療方法包括手術切除、放療及化療，然而其預后仍然不良。在傳統(tǒng)治療方法面臨局限的時候，microRNAs作為調(diào)節(jié)性RNAs可能在膠質(zhì)瘤中發(fā)揮巨大的作用。已有大量研究表明

2、在膠質(zhì)瘤中存在多種microRNAs表達變化，如miR221、miR一451、miR一296等表達上調(diào)并作為原癌基因發(fā)揮作用，而miR34a、miR133a、miR一23a等表達下調(diào)而作為抑癌基因發(fā)揮作用。MicroRNAs靶向治療將是未來膠質(zhì)瘤治療的一個有力前景。目的：探索miR16對腦膠質(zhì)瘤細胞U87MG在體外及體內(nèi)的增殖抑制作用，進而為臨床治療腦膠質(zhì)瘤提供依據(jù)。方法：通過攜帶miR16基因的慢病毒(Lentivirushsa—GF

3、PmiR一16)及陰性對照病毒(Lentivirus—hsaGFP)分別感染U87MG細胞而獲得miR一16過表達U87MG細胞及陰性對照細胞。利用熒光顯微鏡檢測GFP綠色熒光以分析病毒感染效率及用RTPCR技術分析miR16表達情況。用蛋白印跡法(WB)檢測cyclinDl表達情況。將陰性對照慢病毒感染細胞及miR一16過表達慢病毒感染細胞擴增，經(jīng)皮下注射建立皮下移植瘤模型。將未感染慢病毒細胞作為未感染組(untransfected)

4、，陰性對照慢病毒感染細胞作為陰性對照組(negativeconctrol，NC)，miR16過表達慢病毒感染細胞作為陽性組)(miR16)。將三組細胞擴增，經(jīng)原位腦立體注射建立原位腦膠質(zhì)瘤模型。達到觀察點后對顱內(nèi)腫瘤標本進行HE及CD31、cyclinDl免疫組化染色。在原位腦膠質(zhì)瘤模型中計算腫瘤體積并作統(tǒng)計學分析。在皮下成瘤實驗中測算腫瘤生長曲線。結(jié)果：1慢病毒感染后熒光檢測及RTPCR結(jié)果：慢病毒感染后第3天，將miR16組及Nc組

5、細胞熒光顯微鏡下激發(fā)綠光顯示兩者相對于普光下細胞，感染效率80％。RT—PCR檢測顯示miR16組miR一16表達為NC組的3647倍(pO05)。2WB結(jié)果：cyclinDl在miR16組表達比NC組及untransfected組減少。3皮下成瘤結(jié)果：皮下成瘤實驗顯示miR16組并無明顯成瘤，而untransfected組成瘤明顯，腫瘤生長曲線提示存在明顯差異。4顱內(nèi)原位成瘤病理學結(jié)果：鼠腦切片HE染色顯示miR16組成瘤大小比Nc組