Anti-EGFR耦聯(lián)中空金納米球?qū)θ藢m頸癌細(xì)胞放射敏感性影響的研究.pdf

1、目的：探索抗表皮生長因子受體單克隆抗體耦聯(lián)中空金納米球(anti-EGFR/HGNs)增加宮頸癌細(xì)胞對HGNs的選擇性攝取，并增強(qiáng)宮頸癌細(xì)胞的放射敏感性的可行性。
　　方法：采用免疫熒光染色進(jìn)一步證實EGFR在人宮頸癌細(xì)胞株CaSki細(xì)胞表面高表達(dá);通過電化學(xué)置換法制備HGNs;透射電子顯微鏡(TEM)觀察HGNs的尺寸和形態(tài);帶雙官能團(tuán)的SH-PEG-COOH(分子量5000Da)作為anti-EGFR單克隆抗體與HGNs的連接

2、介質(zhì)，介導(dǎo)HGNs的表面修飾;分光光度計檢測以證實抗體與HGNs成功連接;電感耦合等離子體原子發(fā)射光譜儀(ICP-AES)測量金納米粒子溶液的濃度，并分別檢測細(xì)胞內(nèi)HGNs及anti-EGFR/HGNs的攝取量;CCK-8法進(jìn)行HGNs及anti-EGFR/HGNs的細(xì)胞毒性檢測以及接受高能照射后的細(xì)胞存活率分析;AnnexinⅤ-FITC及PI雙染法流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期;細(xì)胞經(jīng)不同處理后提取蛋白， western

3、-blot檢測Bcl-2，Bax，Bad，active caspase3等凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果：免疫熒光染色證實EGFR在CaSki細(xì)胞表面高表達(dá)。TEM測得所合成HGNs平均直徑(54.6±7.11 nm)，壁厚(5.01±2.23 nm)。分光光度計檢測可見HGNs與anti-EGFR連接后表面等離子體共振峰(SPR)的特征性紅移(≈20 nm)，證實anti-EGFR與HGNs成功連接。Anti-EGFR/HGNs

4、與細(xì)胞共同孵育可致細(xì)胞內(nèi)HGNs攝取量顯著增加。HGNs及anti-EGFR/HGNs對CaSki細(xì)胞均無明顯毒性。然而anti-EGFR/HGNs聯(lián)合X線高能照射表現(xiàn)出顯著細(xì)胞毒性。與對照組及X線單純照射組相比，anti-EGFR/HGNs+X線照射組細(xì)胞凋亡率明顯增加。Anti-EGFR/HGNs使處于G2/M期的宮頸癌細(xì)胞比率增加，并通過下調(diào)Bcl-2的表達(dá)及上調(diào)Bax，Bad，caspase-3的表達(dá)促進(jìn)細(xì)胞凋亡。
　　結(jié)