溶血磷脂酸對背根神經(jīng)髓鞘相關(guān)糖蛋白和髓鞘形成負(fù)性調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄因子c-jun表達(dá)的影響及機(jī)制的研究.pdf

1、[目的]
　　 探討單次鞘內(nèi)注射溶血磷脂酸(lysophosphatidic acid LPA)對背根神經(jīng)(dorsal root DR)髓鞘相關(guān)糖蛋白(myeline-associated glycoprotein MAG)表達(dá)的影響以及其作用機(jī)制；探討LPA對背根神經(jīng)髓鞘相關(guān)基因Mag表達(dá)的影響；探討LPA對髓鞘形成的負(fù)性調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄因子c-Jun和p-cJun表達(dá)的影響及其作用機(jī)制，多層次研究LPA誘導(dǎo)神經(jīng)病理性疼痛脫髓鞘的詳

2、細(xì)機(jī)制，尋找緩解或阻止神經(jīng)病理性疼痛的新靶點(diǎn)。
　　 [方法]
　　 1、給雄性的C56小鼠單次鞘內(nèi)注射(intrathecal injection i.t.)LPA(10nmol)，設(shè)立Vehicle組(人造腦脊液artificial cerebralspinal fluid aCSF)，在不同的時間點(diǎn)(注射后24小時、3天、7天)，行DR MAG的western blot，觀察其表達(dá)變化。
　　 2、在單次給

3、雄性的C56小鼠LPA(10nmol i.t.)30分鐘之前，給或不給鈣蛋白酶抑制劑(calpain inhibitor)CalX(10nmol i.t.)，設(shè)立Vehicle-aCSF組，LPA注射24小時之后行DR MAG的免疫熒光染色和western blot，觀察其表達(dá)變化。
　　 3、單次給雄性的C56小鼠LPA(10nmol i.t.)30分鐘之前，給或不給鈣蛋白酶抑制劑(calpain inhibitor)CalX

4、(10nmoli.t.)。設(shè)立Vehicle-aCSF及CalX-aCSF組，在不同的時間點(diǎn)測小鼠的機(jī)械性痛敏和熱痛敏(0天、1天、3天、7天、14天)。
　　 4、單次給雄性的C56小鼠LPA(1nmol i.t.)，在不同的時間點(diǎn)(1小時，3小時，1天，2天，3天，7天，14天)行髓鞘相關(guān)基因Mag的實(shí)時熒光定量PCR(Real-time PCR)。設(shè)立naive組。
　　 5、鞘內(nèi)注射LPA(Inm01)，在不同的

5、時間點(diǎn)(1小時，3小時，6小時，24小時，3天，5天)行c-Jun、p-c-Jun的western blot；或預(yù)先30分鐘給予JNK抑制劑SP600125(0.5μg i.t.)，再給LPA(1nmol i.t.)，在不同的時間點(diǎn)(20分鐘，40分鐘60分鐘，120分鐘，180分鐘)行c-Jun的western blot。
　　 [結(jié)果]
　　 LPA下調(diào)DR MAG的表達(dá)，在單次LPA注射后24小時顯著的降低，而且3

6、天后還能觀察到降低，7天后降低不明顯；預(yù)先30分鐘給予CalX((10nmoli.t.)后，western blot結(jié)果顯示能完全阻止LAP誘導(dǎo)DR MAG的下調(diào)，同時免疫熒光結(jié)果分析和western blot是一致的；鈣蛋白酶抑制劑CalX在LPA注射后1-7天明顯的降低了熱痛敏和機(jī)械痛痛敏，但在Vehicle處理組CalX不起作用；鞘內(nèi)注射LPA(1nmol)之后1小時髓鞘相關(guān)基因Mag的mRNA水平明顯的降低，一直持續(xù)到注射后第7

7、天，但第14天的時候不明顯；給予LPA(1nmol i.t.)之后1個小時，c-Jun明顯的升高，一直持續(xù)到第3天，但第5天不明顯。p-c-Jun也在加LPA之后1小時，明顯的升高，但只持續(xù)到6小時，24小時不明顯。預(yù)先30分鐘給JNK抑制劑SP600125之后，不能抑制DR c-Jun的升高。
　　 [結(jié)論]
　　 LPA可以誘導(dǎo)背根神經(jīng)MAG的下調(diào)且是通過calpain激活介導(dǎo)的。在給予LPA之后背根神經(jīng)髓鞘相關(guān)基因