RSK2在肺腺癌中表達(dá)的臨床意義及其作為放射治療潛在靶點(diǎn)的機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　 探討RSK2在人肺腺癌中的表達(dá)及其臨床意義，并進(jìn)一步研究RSK2在人肺腺癌細(xì)胞中的生物學(xué)功能及其作為放射治療潛在靶點(diǎn)的價(jià)值。
　　 方法：
　　 1、應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)RSK2在26例肺鱗癌、10例肺大細(xì)胞癌、136例肺腺癌及20例癌旁組織中的表達(dá)，并分析其臨床意義。
　　 2、采用無血清培養(yǎng)和aphidicolin預(yù)處理使細(xì)胞周期同步的方法分析肺腺癌中RSK2表達(dá)的與細(xì)胞周期之間的關(guān)

2、系。
　　 3、siRNA技術(shù)沉默NCI-H1395細(xì)胞內(nèi)rsk2基因的表達(dá)，WestemBlot檢測(cè)細(xì)胞周期蛋白cyclinBl和cyclinD1表達(dá)的變化。MTT法檢測(cè)rsk2基因沉默后對(duì)肺腺癌細(xì)胞NCI-H1395增殖的影響。
　　 4、X射線照射肺腺癌細(xì)胞24小時(shí)后，WesternBlot法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)RSK2、cyclinB1的表達(dá)及RSK2磷酸化水平的變化。
　　 5、細(xì)胞照射前半小耐用BI-D1870

3、抑制肺腺癌細(xì)胞內(nèi)RSK2的活性，24小時(shí)后，WesternBlot法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)P-RSK2和cyclinB1表達(dá)的變化；流式細(xì)胞儀檢測(cè)肺腺癌細(xì)胞細(xì)胞周期及凋亡的變化，并進(jìn)一步觀察細(xì)胞克隆形成能力的改變。
　　 結(jié)果：
　　 1、免疫組化結(jié)果顯示20倒癌旁正常的細(xì)支氣管和肺泡上皮細(xì)胞RSK2均不表達(dá)；RSK2在肺鱗癌、大細(xì)胞癌、腺癌中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為19.2％、50.0%、70.6%，鱗癌組和非鱗癌組（大細(xì)胞癌+腺癌）比

4、較，其差別具有統(tǒng)計(jì)意義(P＜0.05)；在肺腺癌中，82例直徑＞3cm的肺腺癌原發(fā)灶中RSK2的陽(yáng)性表達(dá)率為81.7%，高于直徑≤3cm的肺腺癌的陽(yáng)性率55.6%（30/54例）(P＜0.05)，提示RSK2的表達(dá)與腫瘤的大小有關(guān)；RSK2在肺腺癌中的表達(dá)還與性別有關(guān)，在女性組高表達(dá)，陽(yáng)性率為83.1%，但與淋巴結(jié)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、胸膜是否受累、肺腺癌的分化程度以及臨床病理分期無關(guān)(P＞0.05)。
　　 2、無血清培養(yǎng)和aphidi

5、colin預(yù)處理使細(xì)胞同步的研究結(jié)果表明，肺腺癌細(xì)胞內(nèi)RSK2的表達(dá)水平與細(xì)胞周期有關(guān)，在G0/G1期表達(dá)水平最高。
　　 3、采用siRNA干擾技術(shù)降低NCI-H1395細(xì)胞中rsk2的表達(dá)的同時(shí)也抑制cyclinB1、cyclinD1的表達(dá)，并且可抑制NCI-H1395細(xì)胞的增殖。
　　 4、X射線照射后，肺腺癌細(xì)胞內(nèi)RSK2的表達(dá)水平降低，且與照射劑量成反比。但RSK2的磷酸化水平卻幾乎相反。當(dāng)照射劑量≤2Gy時(shí)，

6、RSK2的磷酸化水平輕微降低，當(dāng)照射劑量＞2Gy時(shí)，RSK2的磷酸化水平隨著照射劑量的增加而增加；并且當(dāng)照射劑量在4Gy以上時(shí)，cyclinB1表達(dá)明顯增強(qiáng)。
　　 5、4種肺腺癌細(xì)胞株（LTEP-α-2、SPC-A-1、NCI-H1395、NCI-H1975）照射24小時(shí)后可發(fā)生明顯G2/M阻滯，照射前半小時(shí)應(yīng)用BI-D1870(5μM)抑制肺腺癌細(xì)胞內(nèi)RSK2磷酸化后，均可增加電離輻射誘導(dǎo)的G2/M期阻滯。進(jìn)一步研究表明，聯(lián)

7、用BI-D1870抑制肺腺癌細(xì)胞內(nèi)RSK2的活性后，可明顯抑制照射后細(xì)胞內(nèi)cyclinB1的表達(dá)及細(xì)胞的克隆形成能力，但并不增加電離輻射誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。
　　 結(jié)論
　　 1、RSK2在大細(xì)胞癌和腺癌中陽(yáng)性表達(dá)率高，肺鱗癌中陽(yáng)性表達(dá)率低，因此可作為非小細(xì)胞肺癌中區(qū)別鱗癌與非鱗癌重要的分子生物學(xué)標(biāo)記。
　　 2、RSK2在肺腺癌中的表達(dá)與腫瘤大小、性別有關(guān)，但與肺腺癌淋巴結(jié)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、胸膜是否受累、肺腺癌的分化程度