3種海藻中巖藻聚糖的提取分離、結(jié)構(gòu)表征及其對纖溶系統(tǒng)影響的研究.pdf

1、本文以海蘊(yùn)(Nemacystus decipiens)、江蘺(Gracilaria asiatica)以及石花菜(Gelidium amansii)為原料，采用脫脂后水提取和堿提取的方法，對這3種海藻中的多糖進(jìn)行了提取分離，共得到12種粗多糖組分。利用高效凝膠滲透色譜(HPGPC)和高效液相色譜(HPLC)分別對其分子量和單糖組成進(jìn)行了分析，結(jié)果表明，3種海藻中均有含量不等的巖藻糖，其中，海蘊(yùn)多糖的巖藻糖含量最高，其熱水提取多糖NW2只

2、由巖藻糖和葡萄糖醛酸組成，摩爾比約為7:2。而江蘺和石花菜則以半乳糖為主且含有少量的葡萄糖和巖藻糖，其中，江蘺的冷水提取多糖GVC的巖藻糖含量最高(18％)。根據(jù)硫酸基含量測定結(jié)果，海蘊(yùn)多糖的硫酸化程度普遍較高，其中又以NW2的硫酸基含量最高(20.3％)，而4種江蘺多糖的硫酸基含量均不超過10％，石花菜多糖則以中性糖為主。另外，由分子量測定結(jié)果可以看出，各粗多糖的純度較低，需要進(jìn)一步的純化。木文通用離子交換色譜，對粗多糖NW2和GVC

3、進(jìn)行了純化，得到了組分NP1-4和GP1-3共7種純品多糖，其中得率最高的分別為NP2和GP2，其分子量為487 kD和1173kD，硫酸基含量為19.4％和5.77％，巖藻糖含量為77％和20％。通過以上分析，結(jié)合傅里葉變換紅外光譜(FTIR)、核磁共振波譜(NMR)和甲基化分析結(jié)果表明，NP2為一種巖藻糖硫酸酯，巖藻糖以α1，3連接為主鏈(約80％)，2位上有葡萄糖醛酸支鏈(約20％)，且通過α1，2與主鏈連接。為了確定其細(xì)微結(jié)構(gòu)，

4、將NP2采用溫和稀酸降解獲得其寡糖混合物，經(jīng)BioGel-P4柱分離獲得8個寡糖組分，再通過電噴霧碰撞誘導(dǎo)串聯(lián)質(zhì)譜法(ESI-CID-MS/MS)對這8種硫酸巖藻寡糖進(jìn)行了序列分析，確定其結(jié)構(gòu)序列分別是：Fucp4S3Acα1→3Fucp，F(xiàn)ucp4Sα1→3Fucp4S，F(xiàn)ucpα1→3(GlcUApα1→2)Fucp，F(xiàn)ucp4S3Acα1→3Fucpα1→3Fucp，F(xiàn)ucpSα1→3(GlcUApα1→2)Fucp4Acα1→3

5、Fucp，GluUApα1→3Fucα1→3(GlcUApα1→2)Fucpα1→3Fucp，F(xiàn)ucpSAcα1→3Fucpα1→3(GlcUApα1→2)Fucpα1→3(GlcUApcα1→2)Fucpα1→3Fucp和FucpSα1→3FucpAcα1→3Fucpα1→3(GlcUApα1→2)Fucpα1→3FucpSα1→3(GlcUApα1→2)Fucpα1→3FucpS，硫酸基位于巖藻糖C2位和C4位羥基，乙?；辔挥趲r藻

6、糖的非還原端。寡糖結(jié)構(gòu)分析進(jìn)一步證明NP2是以α1，3連接的巖藻糖為豐鏈，葡萄糖醛酸通過α1，2與主鏈連接。這些結(jié)構(gòu)特殊的寡糖豐富了海洋寡糖庫數(shù)據(jù)，并為進(jìn)一步的糖牛物芯片研究，探討其與蛋白的相互作用提供了基礎(chǔ)。
　　 本文在結(jié)構(gòu)研究的基礎(chǔ)上，以APTT、TT、PT為評價指標(biāo)，評價了純化多糖NP1-4和GP1-3的抗凝血活性，并通過測定UPA、T-PA、PAI-1的值，探討了其對纖溶系統(tǒng)的影響，結(jié)果表明，多糖NP2、NP4和GP2