硫化氫對新生鼠腎上腺髓質(zhì)嗜鉻細胞釋放兒茶酚胺的影響及其機制研究.pdf

1、研究背景：
　　硫化氫(H2S)是一種重要的氣體信號分子，其對細胞膜上多種離子通道有調(diào)控作用。腎上腺髓質(zhì)嗜鉻細胞(adrenal medulla chromaffin cells，AMCs)分泌的兒茶酚胺(catecholamine，CA)在應(yīng)激反應(yīng)中起到了至關(guān)重要的作用。CA參與出生階段呼吸與心血管調(diào)節(jié)，幫助新生鼠適應(yīng)子宮外的環(huán)境。我們先前的研究揭示了H2S可以通過抑制鈣依賴型鉀通道[IK(Ca)current]引起大鼠AMCs

2、分泌CA。然而，H2S是否能觸發(fā)NRACCs釋放兒茶酚胺CA尚不清楚。在我們的研究中，我們使用碳纖維電極(cabon fiber electrode，CFE)安培法和全細胞記錄膜片鉗技術(shù)，探究了H2S能否引起新生鼠AMCs量子化釋放CA以及H2S引起的新生鼠和成年鼠嗜鉻細胞CA分泌的動力學(xué)差異。
　　材料和方法：
　　實驗選擇0到7天的新生鼠三只，取出一共六個腎上腺，立即放入D-hanks溶液中。剪除腎上腺皮質(zhì)，然后把髓質(zhì)單

3、獨放在D-Hanks溶液中。然后將溶液中的髓質(zhì)放入0.6ml混合酶液中（膠原酶Ⅰ3mg/ml，牛血清白蛋白3mg/ml，DNA酶0.23mg/ml，透明質(zhì)酸酶2.4mg/ml）37℃恒溫消化20分鐘。消化后，用200μl移液器將髓質(zhì)吹散。最后，將細胞固定于蓋玻片（用PLL處理過）上然后加入DMEM高糖培養(yǎng)基中（含10％FBS），暫時放入37℃恒溫箱中。新生鼠的嗜鉻細胞需要在12小時內(nèi)使用。實驗操作中，含有原代培養(yǎng)的細胞玻片需放入記錄皿中

4、，并且以1ml/min的速度用標準的細胞外液持續(xù)灌流。使用5微米的碳纖維電極檢測新生鼠兒茶酚胺的釋放。全細胞記錄使用膜片鉗放大器為Axon公司的700B型放大器，玻璃電極電阻為6-10MΩ。
　　所有數(shù)據(jù)均采用均數(shù)±標準誤表示，采用單因素方差分析比較多組間的差異，t檢驗比較兩組間的差異，以P＜0.05為顯著性差異界值。
　　結(jié)果：
　　1.外源性硫化氫可以觸發(fā)新生鼠腎上腺髓質(zhì)嗜鉻細胞分泌兒茶酚胺。
　　2.外源性

5、硫化氫通過抑制鈣依賴性鉀通道引起細胞膜去極化。
　　3.外源性硫化氫引起的新生鼠和成年鼠兒茶酚胺的量子釋放有動力學(xué)的差異。表現(xiàn)在通過單個囊泡的釋放，對比成年鼠而言，新生鼠的分泌量較少但是分泌速度較快。
　　結(jié)論：
　　外源性的硫化氫可以直接引起新生鼠腎上腺髓質(zhì)嗜鉻細胞兒茶酚胺的量子化釋放。相比較成年鼠而言，動力學(xué)分析顯示新生鼠有較快的分泌時間和較少的分泌量。我們的研究結(jié)果提示硫化氫引起的新生鼠腎上腺髓質(zhì)嗜鉻細胞兒茶酚胺