東北地區(qū)4種蘭科植物及其菌根ITS序列分析與其培養(yǎng)體系的建立.pdf

1、蘭科植物(Orchidaceae)屬于被子植物中進(jìn)化程度較高的類群，其種群數(shù)量龐雜且品種類型繁多。在經(jīng)濟(jì)價(jià)值方面，可作為藥用植物使用，也可作為觀賞植物鑒賞。國(guó)內(nèi)外許多學(xué)者一直以來都對(duì)蘭科植物這種類型獨(dú)特的植物菌根有很大的研究興趣。蘭科植物種屬間的進(jìn)化歷程和與其共生的菌根真菌的進(jìn)化歷程之間的關(guān)系也一直是研究熱點(diǎn)和爭(zhēng)論焦點(diǎn)。本研究以東北地區(qū)4種蘭科植物（羊耳蒜Liparis makinoana、雙蕊蘭Diplandrorchis sinic

2、a、山蘭Oreorchis patens和蜻蜒蘭Tulotis asiatica）為例，采用rDNA ITS序列初步分析蘭科植物與其菌根真菌的進(jìn)化關(guān)系。同時(shí)建立該4種蘭科植物菌根真菌培養(yǎng)體系，為種子萌發(fā)提供菌源，或用于菌種保存。本研究的結(jié)果如下:
　　1.從這4種蘭科植物中，分離獲得4株菌根真菌，運(yùn)用rDNA ITS序列分析并結(jié)合形態(tài)學(xué)方法對(duì)其進(jìn)行鑒定。結(jié)果如下:羊耳蒜菌根菌為層出鐮孢菌（Fusarium proliferatum

3、）;雙蕊蘭菌根菌為腐皮鐮孢菌(Fusarium solani);山蘭菌根菌為擬康氏木霉（Trichoderma koningiopsis）;蜻蜒蘭菌根菌為(Cylindrocarpon sp)。
　　2.對(duì)4種植物和從其中分離獲得的4株菌根真菌分別經(jīng)Mega軟件進(jìn)行比對(duì)分析，根據(jù)比對(duì)結(jié)果構(gòu)建Neighbor-Joining Tree。ITS序列比對(duì)分析和聚類結(jié)果初步揭示了其分類地位:
　?、匐p蕊蘭處于最低等的進(jìn)化位置;羊耳蒜

4、的進(jìn)化地位與雙蕊蘭近似;山蘭的進(jìn)化地位高于羊耳蒜;而蜻蜒蘭在4種植物中進(jìn)化地位最高。
　　②羊耳蒜的菌根菌處于最低等的進(jìn)化位置，山蘭菌根菌的進(jìn)化地位與羊耳蒜近似;雙蕊蘭菌根菌的進(jìn)化地位反而高于山蘭和羊耳蒜;蜻蜒蘭菌根菌仍處于最高進(jìn)化地位。由此可見，本研究所選用的4種蘭科植物與其菌根菌的進(jìn)化歷程不是同步進(jìn)行的。
　　3.通過正交試驗(yàn)優(yōu)化培養(yǎng)條件，建立4株菌根真菌培養(yǎng)體系。羊耳蒜菌根真菌最優(yōu)培養(yǎng)體系:2％葡萄糖，0.5％氯化銨，