納米修飾DNA電化學(xué)傳感器及其對轉(zhuǎn)基因植物產(chǎn)品特定序列的檢測.pdf

1、以水熱法合成十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)修飾的PbSe納米粒子。在碳糊電極表面制備的PbSe納米粒子殼聚糖(CHIT)復(fù)合膜上，實現(xiàn)了DNA的固定和雜交，并用循環(huán)伏安法和電化學(xué)交流阻抗法進行了表征。應(yīng)用電活性分子亞甲紫(MV)作為雜交指示劑以微分脈沖伏安法對轉(zhuǎn)基因植物CaMV35S啟動子基因片段進行測定，定量檢測范圍為5.0×10-11-5.0×10-6mol/L，檢測限為1.6×10-11mol/L(3σ)。該傳感器對DNA互補序

2、列、非互補序列和2堿基錯配序列可很好地識別。 先將碳納米管羧基化，然后將羧基化的碳納米管(CNT)涂層于碳糊電極表面，制備了碳納米管修飾電極。利用乙基-(3-二甲基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)和N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)為活化劑活化羧基，通過活化的羧基與末端衍生氨基的DNA之間的共價鍵合作用固定DNA，并以CNT為橋梁將辣根過氧化物酶(HRP)與探針DNA序列鏈接起來，形成HRP標記的探針DNA序列，雜交后使用電化學(xué)方法測定標

3、記上的HRP的量，從而定量測定DNA，檢測限為2.5×10-12mol/L。 將羧基化的碳納米管(CNT)涂層于碳糊電極表面，制備了碳納米管修飾電極，通過活化的羧基與末端帶有氨基的目標DNA形成酰胺鍵以固定DNA，將羧基二茂鐵(FCA)的羧基活化后，同樣利用其與探針DNA氨基之間的作用，將其標記于DNA上，雜交后，用電化學(xué)方法測定標記上的FCA的量，從而定量測定DNA，檢測限為3-3×10-11mol/L。 轉(zhuǎn)基因植物產(chǎn)

4、品的研究開發(fā)給人們的日常消費帶來了更為廣闊的選擇空間，但其安全性問題也引起了人們的關(guān)注。如何對其進行簡單、高效的檢測成為研究的熱點。結(jié)合電化學(xué)生物傳感技術(shù)與分子生物學(xué)技術(shù)，可實現(xiàn)對轉(zhuǎn)基因植物外源基因序列的測定。應(yīng)用納米材料可以大大提高檢測的靈敏度。本論文將納米材料應(yīng)用于DNA電化學(xué)生物傳感器的制備，并對轉(zhuǎn)基因植物某些外源基因特定序列進行了檢測。其主要工作如下： 利用PbSe納米粒子和碳納米管修飾碳糊電極，分別通過吸附法和共價鍵合

5、法將單鏈DNA固定于修飾電極表面，通過掃描電子顯微鏡及電化學(xué)方法進行表征，結(jié)果表明修飾電極能夠有效地固定DNA，且固定在修飾電極上的DNA保持著較好的雜交活性。 分別利用雜交指示劑亞甲紫(MV)、辣根過氧化物酶(HRP)標記和二茂鐵標記的方法對轉(zhuǎn)基因植物外源基因啟動子CaMV35S序列片段進行雜交檢測。結(jié)果表明指示劑檢測法與標記檢測方法對特定序列的檢測均有較高的靈敏度和選擇性，可以較好的識別目標序列，及與目標序列相關(guān)的兩堿基錯配