兩個(gè)FAP家系A(chǔ)PC基因E1～E14突變及p53基因表達(dá)分析.pdf

1、目的:家族性腺瘤性息肉病(familial adenomatous polyposis,FAP)是一種常染色體延遲顯性遺傳病,人群中發(fā)病率為1/10000~1/15000。未經(jīng)治療的患者至40歲左右時(shí),癌變的幾率可達(dá)100％。近年來(lái),由于篩查制度和預(yù)防性結(jié)腸切除術(shù)的開展,FAP死于大腸癌的比例在下降,但死于腸外腫瘤的比例卻呈上升趨逝。通過(guò)基因診斷降低本病的發(fā)病率、死亡率具有重要意義。在APC基因突變陽(yáng)性的家族中,患者的子代有50％的發(fā)病

2、風(fēng)險(xiǎn),有不少報(bào)道認(rèn)為,APC基因突變位點(diǎn)與FAP的臨床表現(xiàn)相關(guān)。本文搜集了兩個(gè)FAP家系,家系中患者除結(jié)直腸腫瘤外,可伴發(fā)子宮內(nèi)膜癌、卵巢癌等腸外惡性腫瘤。通過(guò)兩個(gè)家系A(chǔ)PC基因E1~E14突變的檢測(cè)分析,為FAP的分子遺傳學(xué)機(jī)制和建立監(jiān)控系統(tǒng)提供理論依據(jù)。腫瘤的發(fā)生是多因素、多步驟的復(fù)雜過(guò)程,是癌基因的激活與多個(gè)抑癌基因失活共同作用的結(jié)果。與APC同樣做為抑癌基因的p53基因在結(jié)直腸癌中表達(dá)的研究,也越來(lái)越受到重視,除了對(duì)腫瘤的預(yù)后提

3、供指導(dǎo),也可與FAP基因聯(lián)合做為篩查的目標(biāo)之一。本文同時(shí)采用SP免疫組化方法對(duì)兩個(gè)FAP家系中結(jié)直腸癌患者p53基因的表達(dá)進(jìn)行觀察分析,探討其在結(jié)直腸癌生長(zhǎng)、浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移中的作用,為臨床預(yù)測(cè)腫瘤的轉(zhuǎn)移潛能和預(yù)后提供依據(jù)。
　　材料及方法：1.2006年至2007年2月,我們共發(fā)現(xiàn)2個(gè)經(jīng)臨床確診的FAP家系。2個(gè)家系共有成員44人,FAP患者14人。獲知情同意后,我們抽取9例患者和24例表型正常的血緣親屬為實(shí)驗(yàn)組,1例散發(fā)FAP患者和

4、2例隨機(jī)健康人作為對(duì)照組,兩組均為漢族,性別、年齡相匹配。提取受試者基因組DNA,PCR-SSCP法檢測(cè)APC基因第1~14外顯子突變,對(duì)可疑異常條帶進(jìn)行DNA測(cè)序分析。2.收集兩個(gè)家系FAP患者手術(shù)切除結(jié)、直腸癌標(biāo)本20例,絨毛狀腺瘤組織5例,絨毛狀腺瘤伴不典型增生15例,正常對(duì)照15例,采用免疫組織化學(xué)S-P法,鼠抗人單克隆抗體p53(MAB-0226)與SP試劑盒均為美國(guó)Maxin公司產(chǎn)品(購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)公司),染色設(shè)對(duì)照組

5、,以PBS代替一抗作陰性對(duì)照,用已知陽(yáng)性切片做陽(yáng)性對(duì)照。觀察p53的表達(dá)水平。
　　結(jié)果:1.經(jīng)系譜分析,2個(gè)家系中FAP呈常染色體顯性遺傳,并有遺傳早現(xiàn)。2.PCR-SSCP電泳顯示,DNA條帶未發(fā)現(xiàn)明顯異常。對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物隨機(jī)抽樣進(jìn)行測(cè)序分析,并與APC基因標(biāo)準(zhǔn)cDNA序列(GenBank＃NM-000038)進(jìn)行比對(duì),證實(shí)無(wú)突變。3.p53基因在FAP患者結(jié)、直腸癌中表達(dá)強(qiáng)陽(yáng)性15例;在絨毛狀腺瘤伴不典型增生中表達(dá)陽(yáng)性3例;在絨

6、毛狀腺瘤中表達(dá)陽(yáng)性6例;在正常結(jié)、直腸黏膜中均未見表達(dá)。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,p53在FAP患者腫瘤組織中的表達(dá)與正常結(jié)直腸黏膜中的表達(dá)有顯著性差異。
　　結(jié)論:1.本文兩個(gè)家系未發(fā)現(xiàn)APC基因E1~E14突變。2.FAP的發(fā)生有更復(fù)雜的分子機(jī)理,因此,APC基因可能不應(yīng)該做為FAP的唯一診斷基因。3.FAP患者結(jié)直腸腫瘤組織與正常組織p53的表達(dá)有顯著性差異,并隨腫瘤的演變過(guò)程逐漸增高。該基因?qū)AP的發(fā)展、演變起促進(jìn)作用,但可能不是導(dǎo)