青島地區(qū)不同宮頸病變組織中HPV16 E2基因突變分析.pdf

1、目的：本研究擬通過(guò)分析不同宮頸病變組織中人乳頭瘤病毒(humanpapillomavirusHPV)16型E2基因的突變情況,探討山東省青島地區(qū)HPV16型E2基因的序列多態(tài)性以及序列變異與不同宮頸病變的關(guān)系。
　　 方法：[1]收集山東青島地區(qū)液基細(xì)胞學(xué)檢查(LCT)標(biāo)本并有明確病理診斷者196例,其中非典型鱗狀上皮細(xì)胞(ASCUS)57例,低度鱗狀上皮內(nèi)病變(LSIL)88例,高度鱗狀上皮內(nèi)病變(HSIL)51例;宮頸癌新鮮

2、組織61例,經(jīng)病理診斷為53例宮頸鱗狀上皮細(xì)胞癌,8例宮頸腺癌。
　　 [2]用蛋白酶K法,分別提取新鮮組織和細(xì)胞DNA。
　　 [3]以提取的DNA為模板,采用PCR技術(shù),以通用引物MY09、MY11擴(kuò)增HPVL1基因組片段篩選HPV陽(yáng)性標(biāo)本,采用HPV16型特異性引物進(jìn)一步分型,篩選出HPV16陽(yáng)性標(biāo)本。
　　 [4]以HPV16陽(yáng)性標(biāo)本DNA為模板,擴(kuò)增E2基因全序列。
　　 [5]所獲PCR產(chǎn)物行

3、基因全序列測(cè)序,應(yīng)用DNASTAR軟件,與德國(guó)HPV標(biāo)準(zhǔn)株進(jìn)行比對(duì)分析,尋找HPV16E2的突變位點(diǎn),分析核苷酸和氨基酸的變異,比較熱點(diǎn)突變位點(diǎn)突變頻率在各組的差異。
　　 結(jié)果：[1]山東省青島地區(qū)不同宮頸病變及宮頸癌組織中HPV及HPV16的感染率分別為82.9%和51.6%。
　　 [2]110例HPVl6陽(yáng)性標(biāo)本中有68例E2基因擴(kuò)增成功,共檢測(cè)出11個(gè)堿基突變位點(diǎn),其中10個(gè)導(dǎo)致氨基酸的改變,突變熱點(diǎn)為nt34

4、10(63.2%),3159(55.9%),3249(55.9%)。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示各個(gè)位點(diǎn)的突變與不同級(jí)別宮頸病變之間都沒(méi)有相關(guān)性(P>0.05)。宮頸癌標(biāo)本中基因整合率為65%(14/40),遠(yuǎn)高于CIN3的整合率(6/43)(P<0.001)。
　　 結(jié)論：青島地區(qū)HPV16E2基因存在多個(gè)位點(diǎn)的突變,且發(fā)現(xiàn)G2828A,T3274G,T3384C,T3524C為青島地區(qū)特異性突變,這些位點(diǎn)的突變可能與高度上皮內(nèi)瘤變和浸潤(rùn)性