農(nóng)產(chǎn)品化學(xué)農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)技術(shù)研究.pdf

1、譬7s22n分泌號(hào)簽2業(yè)密級(jí)——uDc—』虹————一一博士學(xué)位論文農(nóng)產(chǎn)品化學(xué)農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)技術(shù)研究紀(jì)淑娟指導(dǎo)教帥姓名gⅡ控琶熬瑤———進(jìn)越直筮睦蹺衛(wèi)業(yè)生——j盟墮L——一中請(qǐng)學(xué)位級(jí)別檀圭專業(yè)名稱盤昌魁堂論文攤芟日期2螋生坦2Q目論文答辯口期2Q籩生且旦學(xué)位授予單位和El期—沈盥盤些盍堂——墊堂主I_旦上—L且答辯委員會(huì)主席—生盤查_童童_j已評(píng)閱人—血壓廑』亂監(jiān)—盤盤盎立L垃盞究望擻攫奎赫堡熬援，捏垂蠢斂援2005年6爿5日摘要2酸

2、度法半定量快速檢測(cè)方法(1)反應(yīng)溫度、pH條件、底物濃度和酶液用量對(duì)膽堿酯酶酶促反應(yīng)均有影響。馬血清膽堿酯酶反應(yīng)的適宜條件為：35。C、pH7O～75、米氏常數(shù)(Km)為288104mol／L。在2OmL反應(yīng)液中適宜的底物濃度為275～1lmmol／L，酶液用量為010mL。(2)酶片快速檢測(cè)法的步驟為：稱取1000mg樣品加5OmL25％乙醇和1滴溴水一具塞小試管中一振蕩提取2min一取提取液1滴一酶片上涂勻一取一片基質(zhì)片蓋在酶片上，

3、根據(jù)初始顏色判斷初始pH值一手捏(35。C)5min，根據(jù)酶片顏色判斷pH值一計(jì)算pH差值，判斷污染程度。(3)pH儀快速檢測(cè)法的步驟為：取馬血清膽堿酯酶025mL一移入具塞小試管一加入蒸餾水18mLJJn入樣液02mL一加1滴溴水一加氯化乙酰膽堿035mL—N0pH值一35℃保溫20min后再測(cè)pH值一計(jì)算pH差值，判斷污染程度。3分光光度半定量快速檢測(cè)方法(1)本試驗(yàn)篩選出的酶源一春小麥和馬血清，經(jīng)過提取純化所得的膽堿酯酶均可用于有

4、機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥的分光光度法快速檢測(cè)。(2)利用植物酯酶快速檢測(cè)的程序?yàn)椋喝?9樣品加入5mL25％乙醇振蕩提取2min，得樣品提取液。取2mlp[t60磷酸緩沖液于試管中一加稀釋后的植物酯酶05mL和1％溴水50uL一35℃保溫lOmin一加入底物(a一乙酸萘酯)06mL和固藍(lán)B鹽06mL一560nm波長(zhǎng)測(cè)定30s至60s反應(yīng)液吸光值的變化一計(jì)算吸光度差值，此差值作為空白。以2mL樣品溶液代替緩沖液按上述過程操作，測(cè)定樣品溶液的

5、吸光度差值，計(jì)算抑制率。(3)利用動(dòng)物酯酶快速檢測(cè)的適宜條件為：稀釋后的動(dòng)物膽堿酯酶50ul、底物(碘化硫代丁酰膽堿)50ul、顯色劑(5，5一二硫代一2，2一二硝基苯甲酸)50ul、反應(yīng)溫度35℃。4氣一質(zhì)聯(lián)用多殘留快速定量檢測(cè)方法(1)基本操作程序?yàn)椋悍Q取一定量樣品一加入乙睛一勻漿一抽濾一c18固相萃取一液一液分配萃取一減壓濃縮一精制一減壓濃縮一轉(zhuǎn)溶一GC—Ms檢測(cè)。(2)一般性樣品前處理適宜條件為：C18固相萃取時(shí)乙腈與水的tLf