玫瑰黃鏈霉菌Men-myco-93-63抗菌物質(zhì)的研究及其發(fā)酵培養(yǎng)基的優(yōu)化.pdf

1、分類號：密級：S4768單位代碼：學(xué)號：1008620132130311玫瑰黃鏈霉菌Men—myco一93—63抗菌物質(zhì)的研究及其發(fā)酵培養(yǎng)基的優(yōu)化StudiesontheantibioticsofStreptomycegoseoflavusMenmyco9363andtheoptimizationofitsfermentationmedium學(xué)位申請人：指導(dǎo)教師：學(xué)科專業(yè)：學(xué)位類別：授予單位：答辯日期：韓興劉大群教授赤國彤教授農(nóng)藥學(xué)農(nóng)學(xué)

2、碩士河北農(nóng)業(yè)大學(xué)二。一六年六月三日摘要玫瑰黃鏈霉菌(StreptomyceYoseoflavbls)Men—myco93—63是分離自馬鈴薯瘡痂病自然衰退土壤的一株生防鏈霉菌，多年室內(nèi)及田間試驗表明該菌株及其發(fā)酵液對棉花黃萎病、瓜類白粉病、蔬菜線蟲病等農(nóng)作物重要病害均有很好的防效，殺菌譜廣，效果穩(wěn)定。本研究對其發(fā)酵所產(chǎn)生的抗生素進(jìn)行了分離及結(jié)構(gòu)鑒定，并在此基礎(chǔ)上以抗生素產(chǎn)量為指標(biāo)，對發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行了優(yōu)化，得到的主要結(jié)果如下：1、從玫瑰黃

3、鏈霉菌(StreptomyceroseoJlavbls)Men—myco一93—63發(fā)酵液沉淀中分離得到一組對棉花黃萎病菌有明顯抑制作用的活性物質(zhì)，外觀為黃色粉末狀。HPLC譜圖顯示活性物質(zhì)主要由三種化合物組成，并且三種化合物有著相同的紫外可見吸收光譜，最大吸收峰都在363nm，且在260nm附近有微弱的次級吸收峰。試驗證實該組物質(zhì)存在光不穩(wěn)定性質(zhì)。于是在避光條件下，經(jīng)制備HPLC對其中含量較高的兩個組分進(jìn)行分離制備，得到純度分別為97

4、15％和9605％的兩個化合物純品，再通過高分辨質(zhì)譜(HRMS)及核磁共振(NMR)方法，確定兩個化合物分子量分別為738和752，并鑒定出兩個化合物結(jié)構(gòu)，二者均為五烯大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，其中一個為報道的已知化合物Roflamycoin。另一個在結(jié)構(gòu)上只比Roflamycoin多一個Ⅱ甲基，目前尚未發(fā)現(xiàn)報道。2、采用菌絲生長速率法和抑菌圈法測定了該抗生素粗品的抑菌譜，其對17種供試植物病原真菌均具有較強抑制作用，毒力測定結(jié)果EC50介于1

5、82mg／L～1218mg／L之間，對疫霉菌效果較差，EC50值為6978mg／L，對供試的致病細(xì)菌和致病放線菌未表現(xiàn)出抑菌作用。3、探究了紫外分光光度法測定發(fā)酵液中抗生素粗品含量的可靠性和準(zhǔn)確性。具體方法為：向發(fā)酵液中加入4倍體積的乙醇，充分振蕩混勻，并超聲提取5rain，之后12000r／min離心3rain，取上清液稀釋后在363nm波長下測定吸光度?？股卮制窛舛仍?2～258pg／mL范圍內(nèi)與吸光度值線性關(guān)系良好。4、從實驗室

6、現(xiàn)用的兩種培養(yǎng)基中選擇出抗生素產(chǎn)量較高的菌絲培養(yǎng)基，以之為初始發(fā)酵培養(yǎng)基，采用PlackettBurman試驗、最陡爬坡試驗和中心組合試驗，以抗生素產(chǎn)量為指標(biāo)，對培養(yǎng)基組分進(jìn)行優(yōu)化，得到優(yōu)化后的培養(yǎng)基組成為葡萄糖2％，可溶性淀粉1％，花生餅粉496％，玉米漿266％，氯化鈉O4％，碳酸鈣03％，磷酸二氫鉀002％。經(jīng)驗證，抗生素粗品產(chǎn)量達(dá)到20306mg／L，較優(yōu)化前的7719mg／L提高了163％。關(guān)鍵詞：玫瑰黃鏈霉菌Men—myco