建立基于超薄切片的三維重構(gòu)技術(shù)解析組織精細(xì)空間結(jié)構(gòu).pdf

1、對(duì)生物組織內(nèi)部精細(xì)結(jié)構(gòu)的分析是了解生物體生理功能的基礎(chǔ)，主要方法是對(duì)組織樣品進(jìn)行三維重構(gòu)。重構(gòu)技術(shù)涉及的主要步驟有對(duì)組織樣品的處理，切片，染色、成像、二維拼接和三維重構(gòu)。目前使用的組織切片主要有石蠟切片，冰凍切片，半薄及超薄切片，臨床上病理分析主要采用石蠟和冰凍切片，切片較厚，分辨率較低；半薄超薄切片主要用于電鏡下組織細(xì)胞亞顯微結(jié)構(gòu)的觀察，切片較薄，分辨率遠(yuǎn)高于石蠟和冰凍切片。對(duì)獲得的圖片進(jìn)行二維拼接和三維重構(gòu)可以獲得組織內(nèi)部精細(xì)空間結(jié)

2、構(gòu)，但是目前的方法均存在Z軸分辨率較低的缺陷。
　　傳統(tǒng)顯微鏡在 X、Y軸上的分辨率為250nm，Z軸的分辨率是700nm，實(shí)際成像分辨率超過1μm。本文建立基于超薄切片方法的高分辨三維成像技術(shù)，可顯著提高Z軸分辨率，用于組織精細(xì)結(jié)構(gòu)的研究。對(duì)組織樣品處理后，可將組織切成50nm-1000nm的連續(xù)半薄或超薄切片，具體切片的厚度即Z軸的分辨率。另外對(duì)切片進(jìn)行染色，或者多重抗體標(biāo)記，利用全自動(dòng)顯微鏡對(duì)連續(xù)切片進(jìn)行成像，對(duì)獲得的圖像進(jìn)