發(fā)酵魚類下腳料制備微生物肥料的菌種篩選及工藝研究.pdf

1、長(zhǎng)期以來魚類下腳料的利用極為簡(jiǎn)單和粗獷，不僅造成了環(huán)境污染，資源也未能得到充分利用。本實(shí)驗(yàn)通過篩選具有高效分解魚類下腳料功能和消除土壤板結(jié)功能的菌種，并對(duì)其組合發(fā)酵過程進(jìn)行優(yōu)化，探索最佳的發(fā)酵條件，制備出含氮豐富、具有解磷解鉀功效的液體微生物肥料。
　　本研究對(duì)從土壤、腐敗魚體、微生物肥料中分離到的54株菌進(jìn)行了單一發(fā)酵試驗(yàn)、解磷解鉀固氮試驗(yàn)、形態(tài)學(xué)觀察、生理生化試驗(yàn)及分子生物學(xué)試驗(yàn)，最終篩選了5株菌[溫和假單胞菌(Acidovo

2、rax temperans)、施氏假單胞菌(Pseudommonas stutzeri)、類芽孢桿菌(Paenibacillus sp.)、黑曲霉(Aspergillus niger)、枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)]用于發(fā)酵魚類下腳料。
　　在確定用于發(fā)酵的菌種后，分別對(duì)復(fù)合菌種擴(kuò)大培養(yǎng)的培養(yǎng)基配方、溫度、pH、轉(zhuǎn)速、接菌量進(jìn)行了單因素試驗(yàn)及部分因素正交試驗(yàn)，最終確定發(fā)酵用菌的擴(kuò)大培養(yǎng)條件為：在復(fù)合培養(yǎng)基中（

3、配方為，蛋白胨15 g/l、葡萄糖20 g/l、MgSO40.03 g/l、NaCl0.01 g/l、K2HPO40.15 g/l），接入5％（v/v）的復(fù)合菌種液，調(diào)節(jié)pH=6.5，放置于溫度為30℃，轉(zhuǎn)速為140 r/min的搖床中進(jìn)行4-6 h培養(yǎng)，即得擴(kuò)大培養(yǎng)液。
　　發(fā)酵工藝的研究通過對(duì)料水比、溫度、pH、轉(zhuǎn)速、接菌量進(jìn)行單因素試驗(yàn)及部分因素正交試驗(yàn)，最終確定發(fā)酵條件為，在料水比為1:7的發(fā)酵底物中，接入11%（v/v）

4、的復(fù)合菌種液，調(diào)節(jié)pH=5.5，放置于溫度為30℃，轉(zhuǎn)速為170 r/min的條件下培養(yǎng)7-8天，制備的發(fā)酵液總氮含量可以達(dá)到32.3 g/L，總磷含量達(dá)到13.4 g/L，總養(yǎng)分含量>4%，達(dá)到復(fù)合微生物液體肥料的標(biāo)準(zhǔn)。
　　發(fā)酵工藝放大試驗(yàn)以料水比為1:7、溫度為30℃條件下的發(fā)酵底物為研究基礎(chǔ)，對(duì)7.5 L發(fā)酵罐、50 L、1噸發(fā)酵罐的轉(zhuǎn)速、接菌量及補(bǔ)料情況進(jìn)行探究，雖然發(fā)酵罐的容量不斷增大，但是轉(zhuǎn)速190 r/min、接菌

5、量15%（v/v）、30 g/L葡萄糖補(bǔ)充量的結(jié)果具有一致性，并且1噸發(fā)酵罐得到的發(fā)酵液總氮含量達(dá)28.4 gN/L，總磷含量10.1 g/L，基本符合微生物液體肥料標(biāo)準(zhǔn)；將得到的發(fā)酵液接種至有機(jī)磷、無(wú)機(jī)磷、阿須貝、硅酸鹽培養(yǎng)基中，30℃培養(yǎng)3-5天后發(fā)現(xiàn)，發(fā)酵液中的菌株生長(zhǎng)效果良好，說明發(fā)酵液具有解磷解鉀固氮效果。
　　本研究得到的微生物液體肥料，一方面緩解了環(huán)境壓力，另一方面使魚類下腳料發(fā)酵成為供給植物營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的肥料，而且具有