毛白楊PtAUX1基因的表達及其在毛白楊中的轉化分析.pdf

1、毛白楊作為速生樹種之一，世界范圍內栽培廣泛，遺傳資源豐富，無性再生能力強，生長迅速，輪伐周期相對來講比較短，被普遍認為是未來生物能源的重要物種之一，并且作為林木分子生物學研究的模式物種。楊樹是繼擬南芥和水稻之后第三個測定全基因組序列的植物，并且是第一個測定全基因組序列的多年生木本植物。
　　 在植物中，最顯著、最快速的激素反應之一就是生長素誘導離體莖和胚芽鞘切段的迅速伸長。生長素參與調控植物的許多生長發(fā)育過程，研究生長素極性運輸

2、與信號轉導有利于揭示生命機理。利用本研究室已構建的PtA UX1表達載體，轉化毛白楊，對基因功能進行分析研究。RT-PCR檢測驗證轉基因毛白楊，分析轉基因植株表型和離體條件下的形態(tài)發(fā)生。
　　 毛白楊內運載體PtAUX1基因經(jīng)Southern雜交，檢測陽性的3個轉基因株系，成功檢測到雜交信號，表明毛白楊生長素內運載體基因PtA UX1構建成功。RT-PCR檢測PtAUX1基因在毛白楊的幼芽、幼葉和幼根中均有表達。
　　

3、通過對毛白楊遺傳轉化體系的優(yōu)化，得到了毛白楊葉圓盤轉化的最佳條件。毛白楊葉片不定芽分化最佳培養(yǎng)基為MS+IAA(0.25 mg/L)+6-BA(0.25 mg/L)+ZT(0.25mg/L)，pH為6.0，分化出的不定芽長到2 cm左右時，切下接種到不含激素的MS培養(yǎng)基中生根。MS培養(yǎng)基添加的細胞分裂素和生長素的量比例在2-5∶1之間時，可以誘導不定根的形成。毛白楊葉片對Kan較敏感，在對轉化毛白楊擴繁、生根及篩選轉基因組培苗時的濃度以

4、50 mg/L為臨界值。選用LBA4404菌株，農(nóng)桿菌濃度的OD600值為0.4時接種葉片，侵染時間15分鐘時的轉化效率最高。在轉基因操作過程中，外植體預培養(yǎng)2d，農(nóng)桿菌與外植體在暗處共培養(yǎng)2d，誘導物是乙酰丁香酮(200μmol/L)能提高轉化率。
　　 過量表達35∶∶PtAUX1轉毛白楊植株表現(xiàn)出了生長旺盛，葉片數(shù)量增多，高生長加快。轉基因毛白楊在低光照條件下，株高為野生型的2-3倍，葉片在顏色、大小、厚度及數(shù)量明顯優(yōu)于野