鴨坦布蘇病毒AH-F10株油乳劑滅活疫苗免疫效力評(píng)價(jià).pdf

1、鴨坦布蘇病毒病是由鴨坦布蘇病毒(Duck Tembusuvirus,DTMUV)引起的以產(chǎn)蛋下降為主要特征的新型傳染病，主要侵害蛋鴨和種鴨，由于目前還沒有治療該病的藥物，給我國(guó)水禽養(yǎng)殖業(yè)帶來了較大的經(jīng)濟(jì)損失。2010年，安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物傳染病實(shí)驗(yàn)室從臨床發(fā)病鴨分離一株鴨坦布蘇病毒，命名為AH-F10株，研制基于該分離株的油乳劑滅活疫苗對(duì)于控制安徽地區(qū)的鴨坦布蘇病有著重要意義。
　　以AH-F10分離株為疫苗候選毒株，制備鴨坦布蘇病

2、毒油乳劑滅活疫苗共三個(gè)批次(1401、1402、1403批次)，從免疫途徑、重復(fù)免疫、超劑量免疫等對(duì)該滅活疫苗的免疫安全性進(jìn)行評(píng)價(jià)。
　　1、取80只健康的60日齡麻鴨，隨機(jī)分為8組，使用1401、1402、1403批次疫苗，以肌肉注射方式分別免疫第1、第2和第3組，第4組注射滅菌PBS作為對(duì)照；以皮下注射方式分別免疫第5、第6和第7組，第8組注射滅菌PBS作為對(duì)照，免疫劑量為0.5mL/只。
　　2、取40只健康的60日齡

3、麻鴨，隨機(jī)分為4組，使用1401、1402、1403批次疫苗經(jīng)肌肉注射方式，分別免疫第1、第2和第3組鴨，第4組鴨肌肉注射滅菌PBS作為對(duì)照，并于首免14天后進(jìn)行二免，免疫劑量均為0.5mL/只；
　　3、取40只健康的60日齡麻鴨，隨機(jī)分為第1-4組，40只120日齡健康的產(chǎn)蛋麻鴨，隨機(jī)分為第5-8組，依次用三個(gè)批次疫苗以1mL/只的超劑量皮下接種一組青年麻鴨和產(chǎn)蛋麻鴨，第4組和第8組皮下注射1.0mL滅菌PBS作為對(duì)照。

4、>　　結(jié)果表明，以0.5mL劑量免疫的各組鴨均無(wú)局部或全身的不良反應(yīng)，精神狀態(tài)、采食、行為活動(dòng)正常，體重檢測(cè)結(jié)果顯示免疫后鴨的體重變化與對(duì)照組沒有差異；以超劑量免疫產(chǎn)蛋麻鴨后，四組產(chǎn)蛋麻鴨總產(chǎn)蛋量從24枚/日最低降至4枚/日，免疫第4天產(chǎn)蛋開始恢復(fù)，至20天產(chǎn)蛋恢復(fù)至24枚/日。試驗(yàn)結(jié)果顯示，用AH-F10分離株制備的鴨坦布蘇病毒油乳劑滅活疫苗在臨床應(yīng)用上有著良好的安全性。
　　為進(jìn)一步研究鴨坦布蘇病毒AH-F10株制備的油乳劑滅

5、活疫苗對(duì)雛鴨的免疫和保護(hù)效果，本研究取30只未感染鴨坦布蘇病毒且抗體為陰性的健康雛麻鴨，分為三組，每組10只，第2組鴨免疫鴨坦布蘇病毒AH-F10株制備的1401批次油乳劑滅活疫苗，接種劑量為0.4mL/只，第1、第3組接種0.4mL滅菌PBS，免疫16天后對(duì)第1、第2組鴨用0.4mL DTMUV(ELD50=10-2.67/0.2ml)攻毒。結(jié)果顯示：免疫后，第2組鴨未出現(xiàn)局部或全身的不良反應(yīng)，使用已建立的間接ELISA方法檢測(cè)鴨血清

6、中DTMUV抗體，免疫第14天，第2組鴨血清抗體平均OD450nm值升高至0.37，抗體檢測(cè)陽(yáng)性率為50％(5/10)。用鴨坦布蘇病毒進(jìn)行攻毒試驗(yàn)，第2組鴨均未見發(fā)病和死亡，疫苗保護(hù)率達(dá)到了100％；第1組鴨發(fā)病率達(dá)到100％(10/10)，死亡率達(dá)到60％(6/10)。體重檢測(cè)結(jié)果顯示，免疫3天后，第2組鴨的平均體重下降7g，后又恢復(fù)增長(zhǎng)，至16天與第1、第3組鴨平均體重持平；攻毒后，第1組、第2組、第3組鴨平均日增重分別為14.8g

7、、23.7g、24.3g。初步結(jié)果表明，1401批次的油乳劑滅活疫苗對(duì)雛鴨有著良好的安全性，對(duì)雛鴨的生長(zhǎng)不產(chǎn)生影響，并能有效的刺激雛鴨產(chǎn)生抗體并保護(hù)雛鴨，為進(jìn)一步研究該鴨坦布蘇病毒油乳劑滅活疫苗提供了一定的數(shù)據(jù)。
　　研究還利用鴨坦布蘇病毒AH-F10株純化的E蛋白(2.978g/L)作為包被抗原，建立并優(yōu)化ELISA檢測(cè)方法的試驗(yàn)條件，確定了抗原的最佳包被濃度為2.978μg/孔，抗原最佳包被條件為4℃包被16h，血清的最佳稀釋