亞臨界R134a萃取技術(shù)在水產(chǎn)品性激素多殘留分析中的應(yīng)用研究.pdf

1、性激素屬于同化激素,由于它具有較強(qiáng)的蛋白質(zhì)同化作用,在上世紀(jì)曾被廣泛的應(yīng)用于動(dòng)物養(yǎng)殖過程中。然而,部分性激素化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定,不易分解,容易在動(dòng)物組織中形成蓄積和殘留,人類如果長(zhǎng)期食用含有這些性激素的動(dòng)物組織,容易導(dǎo)致機(jī)體代謝紊亂、發(fā)育異常甚至誘發(fā)癌變。因此,歐盟自上世紀(jì)80年代開始就通過立法來限制或者禁止在動(dòng)物養(yǎng)殖業(yè)中使用性激素。我國(guó)農(nóng)業(yè)部也頒布了一系列的公告,對(duì)相關(guān)性激素作了明確規(guī)定和要求。但由于利益的驅(qū)使,目前水產(chǎn)養(yǎng)殖中仍然存在濫用和

2、非法添加違禁性激素類藥物的現(xiàn)象。所以,不斷加強(qiáng)對(duì)水產(chǎn)品中性激素類藥物的檢測(cè)和評(píng)價(jià)對(duì)保障水產(chǎn)食品的安全仍然具有重要意義。
　　樣品前處理技術(shù)是性激素殘留分析的關(guān)鍵。簡(jiǎn)單、快速、高效是未來樣品前處理技術(shù)的發(fā)展趨勢(shì)。而我國(guó)目前仍主要采用傳統(tǒng)的溶劑萃取,液液分配,柱層析凈化,前處理方法自動(dòng)化程度低、提取凈化的效率不高,速度慢,且環(huán)境污染嚴(yán)重。因此,開發(fā)選擇性好、靈敏度高、快速高效、綠色環(huán)保的樣品前處理技術(shù)是食品安全檢測(cè)的重要內(nèi)容。本文利用

3、亞臨界R134a萃取技術(shù)作為新型、高效的樣品前處理技術(shù),分別通過與液相色譜(HPLC)和氣相色譜質(zhì)譜(GC-MS)的離線聯(lián)用對(duì)水產(chǎn)品中的幾種性激素殘留進(jìn)行了檢測(cè)分析,并對(duì)萃取工藝、純化方法和檢測(cè)條件進(jìn)行了優(yōu)化,主要結(jié)果如下:
　　1、建立了亞臨界R134a萃取-HPLC離線聯(lián)用技術(shù)檢測(cè)水產(chǎn)品中甲基睪酮、丙酸睪酮、醋酸甲羥孕酮?dú)埩舻姆治龇椒?。首?利用亞臨界 R134a萃取目標(biāo)物,然后,目標(biāo)萃取物經(jīng)過冷凍過濾去脂和C18固相萃取柱凈

4、化后,進(jìn)行HPLC分析。通過單因素實(shí)驗(yàn)對(duì)萃取條件進(jìn)行了優(yōu)化,獲得了最佳的萃取工藝條件:萃取溫度25℃,萃取壓力4 MPa,夾帶劑甲醇用量6 mL。在最優(yōu)的萃取、純化及檢測(cè)條件下,通過空白樣品加標(biāo)回收試驗(yàn)來驗(yàn)證方法的準(zhǔn)確度和檢出限。結(jié)果表明,在20~100μg/kg的添加水平下,各目標(biāo)物的平均回收率在75.4％~94.2%之間;RSD為5.1%~11.2%。方法的檢出限為8.4~12.5μg/kg。
　　2、建立了亞臨界R134a萃

5、取-GC-MS離線聯(lián)用技術(shù)檢測(cè)水產(chǎn)品中6種性激素殘留的分析方法。首先,利用亞臨界 R134a萃取目標(biāo)物,然后,目標(biāo)萃取物經(jīng)過冷凍過濾去脂,C18和NH2固相萃取柱聯(lián)用凈化后,用七氟丁酸酐衍生后進(jìn)行GC-MS分析。在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上,以己烯雌酚的為代表,通過響應(yīng)曲面法對(duì)萃取工藝進(jìn)行了優(yōu)化,獲得了最佳的萃取工藝條件:萃取壓力4MPa、萃取溫度26℃、夾帶劑用量4.7 mL。在最優(yōu)的萃取、純化及檢測(cè)條件下,通過空白樣品加標(biāo)回收試驗(yàn)來確定方法

6、的準(zhǔn)確度和檢出限。結(jié)果表明,在1~10μg/kg的添加水平下,6種性激素的平均回收率在70.5%~103.6%之間,RSD為2.1%~12.1%,方法的檢出限為0.2~1μg/kg。
　　3、在市售實(shí)際樣品中未檢出本論文所考察的幾種性激素,本論文選擇用添加目標(biāo)物的飼料來投喂錦鯉,從而制得含目標(biāo)物的陽性樣品,并用來檢驗(yàn)上述研究建立起來的分析方法的適用性。該方法從陽性樣品中成功檢測(cè)出己烯雌酚殘留,平均殘留量為13.8μg/kg。