兔血超氧化物歧化酶的提取及其在酸奶中的應(yīng)用.pdf

1、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)是一種廣泛存在于動物、植物和微生物中的金屬蛋白酶，它能夠催化超氧陰離子自由基(O-2·)發(fā)生歧化反應(yīng)，清除生物體內(nèi)的自由基，在食品、化妝品、醫(yī)療等行業(yè)得到廣泛應(yīng)用。我國是一個兔業(yè)大國，兔血資源豐富，但是大量的兔血都未被充分利用。兔血中含有豐富的SOD，本試驗(yàn)采用新鮮兔血為原料提取SOD，并以牛乳為載體，SOD作為功能因子，研制富含SOD的酸奶，這為SOD保健食品的開發(fā)提供

2、一個有效途徑。在此過程中主要研究了:超聲波制備溶血液和熱變性法除雜蛋白的最佳工藝條件;SOD的純化及其部分性質(zhì)的研究;SOD酸奶對人工胃腸道消化液的穩(wěn)定性和貯藏穩(wěn)定性。主要研究結(jié)果如下:
　　1.采用超聲波與溶脹法相結(jié)合制備溶血液，考察紅細(xì)胞與水的體積比、超聲時(shí)間和超聲功率對SOD比活力的影響，通過單因素和正交試驗(yàn)得到最佳工藝參數(shù)為:紅細(xì)胞與水體積比為5∶1，超聲時(shí)間10min，超聲功率200W，在此條件下得到的溶血液中SOD比活

3、力最高。
　　2.采用熱變性法除雜蛋白，考察熱變性過程中熱變性時(shí)間、熱變性溫度和CuCl2體積分?jǐn)?shù)對SOD比活力的影響，利用響應(yīng)面分析法對其工藝條件進(jìn)行優(yōu)化，結(jié)果表明:CuCl2體積分?jǐn)?shù)對熱變性法提取SOD比活力影響最大，其次是熱變性時(shí)間和溫度;經(jīng)響應(yīng)面法建立的回歸模型極顯著(P＜0.01)，可用于實(shí)際值的預(yù)測;優(yōu)化得到熱變性除雜蛋白的最佳工藝參數(shù)為熱變性時(shí)間10.60min、熱變性溫度54.95℃、CuCl2體積分?jǐn)?shù)1.09％，

4、在此條件下，SOD比活力為2165.39U/mg;驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)得到的SOD比活力為（2204.50±12.63）U/mg，與預(yù)測值的相對誤差為1.77％，表明可以采用響應(yīng)面分析法對熱變性法除雜蛋白最佳工藝條件進(jìn)行優(yōu)化。
　　3.采用丙酮沉淀和柱層析對SOD進(jìn)行純化，結(jié)果表明:當(dāng)冷丙酮體積為粗酶液體積的1.0倍，靜置時(shí)間為30min時(shí)，得到的SOD比活力最大;經(jīng)SephadexG-75凝膠過濾與Macro-Prep DEAE suppo

5、rt陰離子交換層析，收集酶液超濾濃縮，測得酶的總活力為20474U，比活力為15749.23 U/mg，回收率達(dá)19.08％，純化倍數(shù)為487.47。
　　4.對純化得到的SOD進(jìn)行純度和種類鑒定，并考察其部分性質(zhì)，結(jié)果表明:純化得到的SOD已達(dá)到電泳純度，測得兔血SOD的亞基分子量約16.0KDa，最大紫外吸收峰為270nm，對H2O2敏感;pH值在5.0～9.0范圍內(nèi)，溫度在50℃以下具有較好的穩(wěn)定性，表明純化得到的兔血SOD

6、為Cu，Zn-SOD。
　　5.考察SOD酸奶在模擬胃腸道環(huán)境中的穩(wěn)定性。結(jié)果表明，SOD及SOD酸奶中的SOD在pH2的人工胃液中作用3h后，SOD剩余活性為0.1％和8.7％，而在pH3和4的人工胃液中能保持較高的活性，分別為50.4％、60.7％和65.4％、84.4％;在人工腸液中作用4h后，SOD剩余活性為44.8％;在不同濃度的膽鹽溶液中作用4h后，SOD剩余活性均在87.4％以上;在人工胃液、腸液的連續(xù)消化結(jié)束后，S

7、OD溶液及SOD酸奶中SOD剩余活性分別為15.4％和72.4％?？梢?，SOD對pH3以上的人工胃液、人工腸液、膽鹽具有較好的耐受性，而SOD酸奶中的SOD對模擬胃腸道消化液具有更高的穩(wěn)定性。
　　6.SOD酸奶在4℃的條件下貯藏，貯藏6d后，酸奶中SOD剩余活性為84.5％,貯藏14d后，剩余活性為64％;pH值和酸度變化不明顯，且各組間差異不顯著;TBA值里上升趨勢，在貯藏12d后有所減小，試驗(yàn)組的TBA值均比對照組（未添加S