牛乳清活性蛋白質(zhì)的結(jié)晶特性研究.pdf

1、牛乳清中含有許多活性蛋白質(zhì)，如免疫球蛋白G(IgG)、牛血清蛋白(BSA)、乳鐵蛋白、乳過氧化物酶。前人獲得這些蛋白質(zhì)主要是利用柱層析的手段，但是層析有其自身的局限性，包括設(shè)備及耗材成本高、過程操作要求高等。結(jié)晶作為一種設(shè)備耗材成本小、操作簡(jiǎn)單的單元操作，是分離乳清活性蛋白質(zhì)另一種選擇。本工作就是以此為目標(biāo)，選擇及建立一種合適的結(jié)晶方法，并利用這種方法探索得到乳清蛋白質(zhì)結(jié)晶體的適宜條件以及其結(jié)晶行為，以期為乳清活性蛋白質(zhì)的結(jié)晶分離打下基

2、礎(chǔ)。
　　首先，為了驗(yàn)證這種方法是否可以得到乳清中的蛋白質(zhì)，本工作以BSA+鹽+水體系為樣本，研究了在1-3 M NaCl、pH4.7-8.0之間的1.0-3.0 mg/mL BSA的溶解度數(shù)據(jù)以及成核數(shù)據(jù)。接著通過實(shí)驗(yàn)方法獲取了2.5 mg/mL BSA、pH7.0、1 M NaCl條件下的BSA結(jié)晶體的形貌圖像，并利用凍干實(shí)驗(yàn)對(duì)結(jié)晶體中的雜質(zhì)進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)研究。最后利用固液相平衡原理得到了一個(gè)回歸方程，并利用本實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)擬合了該方程

3、的參數(shù)。
　　本論文還初步探索了乳清體系的結(jié)晶條件，發(fā)現(xiàn)pH7.0時(shí)，IgG在乳清上清液中的含量會(huì)明顯減少，而其它pH(4.7、5.8、8.0)下，隨著鹽濃度的增加，乳清蛋白中的各種蛋白的比例變化不明顯，因此，在pH4.7-8.0之間時(shí)，pH7.0可以作為乳清結(jié)晶的較理想pH值，而IgG可以作為目標(biāo)蛋白質(zhì)。
　　最后，本工作還利用熒光倒置顯微鏡分別觀察了高鹽濃度和低鹽濃度下，pH4.7和pH7.0時(shí)的乳清結(jié)晶行為，并以同條件