Lipstatin發(fā)酵工藝優(yōu)化研究.pdf

1、Lipstatin是毒三素鏈霉菌的次級(jí)代謝產(chǎn)物，是一種有效的胰脂肪酶抑制劑，專一性強(qiáng)，只對(duì)胃腸道系統(tǒng)起作用。Lipstatin的氫化產(chǎn)物Orlistat（奧利司他）是一種重要的預(yù)防和治療與肥胖相關(guān)的疾病的藥物，副作用小，并對(duì)神經(jīng)中樞系統(tǒng)無作用，是近10年來減肥藥物市場(chǎng)上主要的減肥藥物。本文在本實(shí)驗(yàn)室前期研究的基礎(chǔ)上，對(duì)Lipstatin的發(fā)酵工藝進(jìn)行了優(yōu)化研究。
　　首先進(jìn)行了培養(yǎng)基的優(yōu)化研究，依據(jù)本實(shí)驗(yàn)室前期的單因素實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果

2、，對(duì)Lipstatin的發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行了正交實(shí)驗(yàn)，優(yōu)化了發(fā)酵培養(yǎng)基，確定的最佳發(fā)酵培養(yǎng)基配方為：亞油酸3.0％，黃豆粉6.0%，甘油2.0%，卵磷脂1.0%，與優(yōu)化前相比，發(fā)酵單位提高了17.1%。研究了無機(jī)鹽對(duì)Lipstatin發(fā)酵效價(jià)的影響，結(jié)果表明：當(dāng)培養(yǎng)基中K2HPO4濃度為0.09%，MgSO4濃度為0.01%時(shí)，Lipstatin發(fā)酵效價(jià)提高了2.3%。研究了不同消沫劑對(duì)Lipstatin發(fā)酵的影響，研究發(fā)現(xiàn)使用SAG消沫效

3、果最好。對(duì)于泡沫過大的罐批，加入豆油消沫，可適當(dāng)提高Lipstatin的發(fā)酵效價(jià)。
　　在以上優(yōu)化培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，結(jié)合本實(shí)驗(yàn)室前期的單因素試驗(yàn)研究成果，在10L的發(fā)酵罐中，用正交實(shí)驗(yàn)法對(duì)Lipstatin的發(fā)酵工藝條件進(jìn)行了優(yōu)化，確定最佳的工藝條件為：溫度27℃，接種量9%，種齡30h，發(fā)酵液pH7.0。此外還對(duì)發(fā)酵過程中攪拌轉(zhuǎn)速、通氣量、培養(yǎng)基的裝量進(jìn)行了優(yōu)化，結(jié)果表明當(dāng)發(fā)酵罐培養(yǎng)基裝量6.0L，轉(zhuǎn)速260rpm，通氣量0.8v

4、vm時(shí)最有利于Lipstatin的生物合成。在此基礎(chǔ)上對(duì)Lipstatin的發(fā)酵過程進(jìn)行了變溫培養(yǎng)研究，在接種后維持溫度27℃，在36h后調(diào)整溫度為25℃，與恒溫培養(yǎng)相比，Lipstatin發(fā)酵效價(jià)提高了3.5%。
　　采用優(yōu)化的發(fā)酵培養(yǎng)基配方及發(fā)酵工藝條件，對(duì)Lipstatin的發(fā)酵過程進(jìn)行亞油酸/辛酸補(bǔ)料、L-亮氨酸和豆油的補(bǔ)料研究，發(fā)現(xiàn)補(bǔ)料方式對(duì) Lipstatin的生物合成有重要的影響，確定最佳的補(bǔ)料工藝為：在接種36小時(shí)