心肌梗死時(shí)Sca-1+,c-kit+心肌干細(xì)胞增殖分化的研究.pdf

1、目的:心肌梗死是由于冠狀動(dòng)脈血流供應(yīng)不足，造成供血區(qū)缺血而導(dǎo)致心肌壞死，陳舊性心肌梗死可見(jiàn)壞死的心肌逐漸被瘢痕組織替代，失去收縮功能最終導(dǎo)致心力衰竭。臨床用藥物、介人手術(shù)和冠狀動(dòng)脈旁路術(shù)等方法治療，但是這些方法只能夠改善臨床癥狀并不能修復(fù)壞死的心肌從根本上達(dá)到治愈的效果。細(xì)胞移植有希望成為一種組織再生的治療手段，但是其來(lái)源細(xì)胞可能會(huì)受到免疫排斥、倫理以及療效不確切等因素的限制，因此尋找合適的種子細(xì)胞是心肌再生領(lǐng)域的研究趨勢(shì)。近年來(lái)大量研

2、究發(fā)現(xiàn)在成人和動(dòng)物的心臟中都存在心肌干細(xì)胞(cardiac stem cell，CSC)，其具有多能干細(xì)胞特性，克隆和分化誘導(dǎo)后表達(dá)心肌細(xì)胞的特異性蛋白a-肌動(dòng)蛋白(a-actin)，縫隙連接蛋白Cx43(connexin43)等，因此CSC日益受到學(xué)者們的關(guān)注。CSC具有分化為心肌細(xì)胞的潛能，并且表達(dá)干細(xì)胞的標(biāo)志物干細(xì)胞抗原-1（stem cell antigen-1，Sca-1）、酪氨酸激酶受體(tyrosine kinase re

3、ceptor，c-kit)等。目前研究較多且增殖分化能力比較強(qiáng)的有c-kit陽(yáng)性心臟干細(xì)胞和Sca-1陽(yáng)性心肌干細(xì)胞。大量體外實(shí)驗(yàn)及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，CSC具有分化成心肌細(xì)胞的潛能，但這種細(xì)胞在人體內(nèi)的是否能夠分化為心肌細(xì)胞還待證實(shí)。本實(shí)驗(yàn)擬通過(guò)免疫組織化學(xué)S-P法，檢測(cè)人心臟組織中c-kit、Sca-1、a-actin和Cx43的表達(dá)并研究其相關(guān)性以及向心肌細(xì)胞的分化情況，繼而明確心肌梗死后心肌干細(xì)胞的增殖和分化情況，為CSC的進(jìn)一步研究

4、及臨床應(yīng)用提供思路。
　　 方法:實(shí)驗(yàn)所用病例共計(jì)75例，全部來(lái)自大連醫(yī)科大學(xué)病理學(xué)與法醫(yī)學(xué)教研室尸檢存檔蠟塊。其中正常心肌組25例，心肌梗死組50例，全部病例均經(jīng)過(guò)組織學(xué)檢查證實(shí)。死亡時(shí)間為自心梗發(fā)生后一周內(nèi)，全部案例均在死亡48小時(shí)內(nèi)進(jìn)行尸檢。每例標(biāo)本分別自左心室前壁、后壁、側(cè)壁、室間隔和心尖處各取一塊組織，經(jīng)石蠟包埋后連續(xù)切片，運(yùn)用免疫組化S-P法檢測(cè)c-kit和Sca-1在正常心肌和心肌梗死區(qū)、梗死周圍區(qū)的表達(dá)情況，并對(duì)

5、結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，以了解二者在不同區(qū)域區(qū)之間的相關(guān)性。本實(shí)驗(yàn)采用連續(xù)切片，因此可以用作不同抗體對(duì)同一個(gè)細(xì)胞的免疫組化染色結(jié)果的觀察，進(jìn)而檢測(cè)Sca-1陽(yáng)性細(xì)胞和c-kit陽(yáng)性細(xì)胞是否表達(dá)心肌細(xì)胞的特異性蛋白a-actin，Cx43，以確定他們是否可以向心肌細(xì)胞方向分化。
　　 結(jié)果:1.Sca-1在正常心肌中陰性或弱陽(yáng)性表達(dá)，在心肌梗死區(qū)和梗死周圍區(qū)呈陽(yáng)性和強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，在瘢痕組織中或心肌細(xì)胞之間，可見(jiàn)胞漿或胞膜被染成棕褐色或棕

6、黃色的圓形或梭形細(xì)胞，散在分布或成簇狀分布，陽(yáng)性率分別為12％、94％、82％;c-kit同樣表達(dá)在細(xì)胞的胞漿或胞膜，在正常心肌中有少量表達(dá)，大部分不表達(dá)，而在心肌梗死組中梗死區(qū)的陽(yáng)性率為72％，梗死周圍區(qū)的陽(yáng)性率為58％，兩者在正常心肌、心肌梗死區(qū)、梗死周圍區(qū)的表達(dá)均存在顯著差異(P＜0.05)。2.Sca-1和c-kit的表達(dá)部位大體相同，主要位于心肌梗死區(qū)和梗死周圍區(qū)，但是c-kit的表達(dá)量顯著低于Sca-1。3.采用Spearm

7、an等級(jí)相關(guān)檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)Sca-1和c-kit二者在心肌梗死區(qū)的表達(dá)具有相關(guān)性。4.部分Sca-1陽(yáng)性細(xì)胞可見(jiàn)a-actin抗體的免疫組化染色呈現(xiàn)棕黃色和棕褐色表達(dá)，但是Cx43呈陰性表達(dá);c-kit陽(yáng)性細(xì)胞可見(jiàn)Cx43抗體的免疫組化染色呈現(xiàn)棕黃色和棕褐色表達(dá)，但是a-actin呈陰性表達(dá)。
　　 結(jié)論:
　　 1.Sca-1和c-kit在梗死心肌部位的表達(dá)明顯高于梗死周圍區(qū)和正常心肌組織。并且，Sca-1陽(yáng)性細(xì)胞的數(shù)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)