香豆素類(lèi)熒光探針的合成、性質(zhì)及應(yīng)用研究.pdf

1、熒光探針以其高選擇性高靈敏度以及成本低等眾多優(yōu)點(diǎn)備受人們的關(guān)注，在當(dāng)今科研領(lǐng)域很受歡迎，也在離子、分子識(shí)別等方面有特別廣泛的應(yīng)用。香豆素具有光穩(wěn)定性較好、 Stokes位移較大、熒光量子產(chǎn)率較高等優(yōu)點(diǎn)作為一種熒光團(tuán)被大家熟知。谷胱甘肽(GSH)是哺乳動(dòng)物和原核細(xì)胞中常見(jiàn)的一種細(xì)胞內(nèi)硫醇，而且是含量最高的生物硫醇（大約在1-10mM，半胱氨酸:30-200μM，高半胱氨酸:5-15μM）。谷胱甘肽在細(xì)胞內(nèi)作為一種內(nèi)源性的調(diào)節(jié)氧化還原平衡的

2、物質(zhì)，具有防御毒素和自由基的作用，在生物系統(tǒng)中準(zhǔn)確定量地分析GSH的濃度有很重要的臨床意義。
　　本文設(shè)計(jì)合成了基于香豆素的谷胱甘肽熒光探針和銅離子熒光探針，在7-二乙胺基香豆素的四位引入氯合成一個(gè)結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單的探針1，并利用氫譜、質(zhì)譜等手段對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行表征;利用紫外吸收光譜、熒光發(fā)射光譜對(duì)探針1的物理性質(zhì)進(jìn)行研究，在含水90％體系中，探針1與GSH反應(yīng)前后熒光信號(hào)峰由原來(lái)的507 nm變化到546 nm，呈現(xiàn)一個(gè)很好的比率熒光響應(yīng)，

3、溶液的顏色由橙色變成橙紅色，熒光由黃綠色變成橙色;并且探針1對(duì)GSH的最低檢測(cè)極限為0.38μM;同時(shí)我們也對(duì)Cys（半胱氨酸）和Hcy（高半胱氨酸）的檢測(cè)限進(jìn)行了研究，計(jì)算得出兩者的最低檢測(cè)極限分別為0.05μM和0.06μM;探針1與GSH的結(jié)合計(jì)量比為1∶1;探針1與GSH的一級(jí)反應(yīng)動(dòng)力學(xué)常數(shù)為0.1447±0.004min-1;探針1與GSH、Cys和Hcy的作用機(jī)理也通過(guò)氫譜、質(zhì)譜、紫外吸收光譜等手段進(jìn)行研究證明。探針1細(xì)胞毒

4、性低，細(xì)胞滲透力佳，可以對(duì)細(xì)胞中的GSH進(jìn)行識(shí)別，并且對(duì)細(xì)胞中的GSH濃度的變化非常敏感。
　　2，2'-二甲基吡啶胺(DPA)因其實(shí)比較好的配體常在超分子體系中被應(yīng)用，我們利用氯代香豆素與其連接合成了探針2，并通過(guò)氫譜對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行表征;利用紫外吸收光譜、熒光發(fā)射光譜對(duì)探針2的選擇性進(jìn)行研究，探針2對(duì)銅離子具有專(zhuān)一的選擇性。在乙腈與水混合體系中，探針2熒光發(fā)射峰在452 nm處，加入銅離子產(chǎn)生淬滅響應(yīng)，溶液的顏色由無(wú)色變成黃色，熒