脈沖場凝膠電泳在酮綠假單胞菌分子流行病學研究中的應用.pdf

1、目的：
　　 建立脈沖場凝膠電泳(Pulsed-Field Gel Electrophoresis，PFGE)基因分型方法，對天津市南開醫(yī)院和天津市兒童醫(yī)院臨床分離的銅綠假單胞菌(Pseudomonasaeruginosa，PA)進行基因分型，進而對PA進行流行病學分析。
　　 方法：
　　 (1)臨床送檢標本按《全國臨床檢驗操作規(guī)程》鑒定為PA，質(zhì)控菌株為PAATCC27853。
　　 (2)采用K-B

2、紙片擴散法對PA進行藥敏試驗，測試其對不同抗菌藥物的敏感性，藥敏結(jié)果按美國CLSI標準判讀。南開醫(yī)院PA的藥敏試驗檢測14種抗菌藥物，兒童醫(yī)院PA的藥敏試驗檢測15種抗菌藥物。
　　 (3)對兩家醫(yī)院臨床分離得到的128株PA進行PFGE基因分型和流行病學分析。
　　 (4)對臨床分離出PA宿主的臨床病例進行回顧性分析，判斷菌株分離時段是否處在感染狀態(tài)。
　　 結(jié)果：
　　 (1)感染和定植菌株的判斷：來

3、自于南開醫(yī)院的72株PA中，有57株(79％)菌可能為感染菌株；而來自于兒童醫(yī)院的56株PA中，有39株(70％)可能為感染菌株。兩家醫(yī)院的定植菌株均來自于呼吸道。
　　 (2)菌株的臨床來源和分布：兩家醫(yī)院的PA菌株主要分離于痰標本，南開醫(yī)院有51株，占71％；兒童醫(yī)院為51株，占90％；其他菌株分離于膽汁、腹腔液、膿性分泌物、血液和尿液標本。南開醫(yī)院的PA菌株主要來自于中西結(jié)合腦病科和呼吸科，而兒童醫(yī)院菌株主要分離于呼吸科和

4、內(nèi)分泌科。
　　 (3)菌株的藥物敏感性：南開醫(yī)院的PA菌株對14種抗菌藥物的耐藥率在30％-70％之間；但兒童醫(yī)院的PA菌株對抗生素的敏感性與南開醫(yī)院菌株有所不同，耐藥率在0％-100％之間，兒童醫(yī)院菌株均對氨芐西林耐藥，對丁胺卡那霉素、環(huán)丙沙星敏感。
　　 (4)PFGE分型：南開醫(yī)院的72株PA被分為48個PFGE型，Ⅰ型5株；Ⅱ和Ⅲ型各4株；有14種PFGE譜各由2株菌共有，其余31株菌各表現(xiàn)為獨特的PFGE譜。

5、兒童醫(yī)院56株PA被分為18個型別，A型26株；B型12株；C型3株；其余15株各成獨特的PFGE譜。兩家醫(yī)院PA菌株中未見相同或相近的PFGE譜菌株。
　　 (5)兒童醫(yī)院PFGE優(yōu)勢型和耐藥性的關系：兒童醫(yī)院的A和B型菌株幾乎均對4種抗菌藥物耐藥和3種抗菌藥物敏感。但對其余8種藥物兩型表現(xiàn)了不同的耐藥率，其中4種藥物耐藥率有明顯差別。
　　 (6)追溯兩家醫(yī)院主要PFGE型別菌株的時間和空間分布：南開醫(yī)院Ⅰ型菌株是同

6、一患者不同時間分離得到的菌株，Ⅱ型菌株和Ⅲ型菌株由不同科室患者在不同時間分離得到；兒童醫(yī)院A型菌株來自于呼吸科的不同患兒，而B型菌株主要來自內(nèi)分泌科的不同患兒。
　　 結(jié)論：
　　 (1)新建立的PFGE方法能夠明確地對PA進行基因分型，可以作為有效的技術(shù)手段用于分子流行病學的研究和臨床實踐。
　　 (2)不同醫(yī)院的臨床分離得到的PA菌株抗生素耐藥譜不同。
　　 (3)南開醫(yī)院的PA菌株呈散發(fā)感染的特征，