甲醛和乙醇固定腦生物力學(xué)及生物化學(xué)推斷死亡時(shí)間研究.pdf

1、目的和意義：
　　準(zhǔn)確地推斷死亡時(shí)間(Postmortem Interval, PMI)一直是法醫(yī)鑒定的重要課題。本實(shí)驗(yàn)利用生物力學(xué)及生物化學(xué)理論和技術(shù)，同步檢測(cè)多項(xiàng)腦組織生物力學(xué)和生物化學(xué)指標(biāo)組合地推斷PMI。
　　材料與方法：
　　屠宰場(chǎng)放血處死的成年家豬(4個(gè)月齡，體重120-150kg)，提取全腦組織，置于恒溫恒濕人工氣候箱，每隔12h用標(biāo)準(zhǔn)化拍照裝置拍照并觀察各時(shí)間點(diǎn)腦組織大體形態(tài)變化，“六定”規(guī)范冠狀切取腦

2、組織，制備成標(biāo)準(zhǔn)化生物力學(xué)試件和固定-萃取液檢材；利用Photoshop CS5軟件計(jì)算RGB、R、G和B值；常規(guī)制作腦組織石蠟切片，分別HE、Glees神經(jīng)纖維染色，用Image-Pro Plus6.0量化分析，計(jì)算白質(zhì)間隙總面積及IOD；利用便攜式生物力學(xué)檢測(cè)儀(KDI-0.2)對(duì)4％甲醛和80%乙醇固定的標(biāo)準(zhǔn)化試件行縱軸單向壓縮，記錄力-變形曲線、極限載荷、彈性模量、平均力、應(yīng)力等數(shù)據(jù)；利用PH計(jì)和紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)對(duì)4%甲醛和

3、80%乙醇固定-萃取液進(jìn)行PH值和吸光度、色度、與茚三酮、蘇丹Ⅲ反應(yīng)后吸光度檢測(cè)。
　　統(tǒng)計(jì)分析
　　利用SPSS16.0、excel、GraphPad Prism5等軟件統(tǒng)計(jì)分析，取均數(shù)和標(biāo)準(zhǔn)差，采用t檢驗(yàn)及方差分析，以P<0.05為顯著性差異。
　　結(jié)果：
　?、偶邑i腦RGB、R、G值均呈時(shí)序性下降（P<0.05），死后60-180h，與PMI相關(guān)回歸方程分別：Y=-4.3168X+124.16(R2=0.8

4、544)，Y=-8.1864X+157.18(R2=0.8742)，Y=-6.2943X+142.04(R2=0.9232)，而0-72h B值與PMI的方程為Y=-0.972X+136.9(R2=0.9803)。
　?、圃贕lees染色圖片量化分析各項(xiàng)指標(biāo)中，死后0-48h，與PMI有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的腦白質(zhì)間隙總面積：Y=1.115X+13.21(R2=0.9653)，IOD：Y=2.61X+28.01(R2=0.9616)；腦干間

5、隙總面積：Y=0.2X+10.66(R2=0.987)，IOD: Y=0.5X+27.29(R2=0.991)。
　?、窃?%甲醛和80%乙醇固定腦組織生物力學(xué)參數(shù)中，與PMI有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的極限載荷、平均力、彈性模量、斷裂能量均呈下降趨勢(shì)（P<0.05）。死后12-60h，甲醛固定的回歸方程分別：Y=-0.3299X+21.22(R2=0.9273)，Y=-0.107X+6.998(R2=0.8885)，Y=-1.166 X+79

6、.12(R2=0.8883)，Y=-0.3958X+28.91(R2=0.8757)。死后12-48h，乙醇固定的回歸方程分別：Y=-0.324X+17.6(R2=0.7854)，Y=-0.06X+4.103(R2=0.8173)，Y=-1.025X+56.78(R2=0.7137)，Y=-0.44X+29.22(R2=0.5281)。
　　⑷在4%甲醛和80%乙醇腦固定-萃取液生化指標(biāo)中，死后12-60h，甲醛和乙醇萃取液350

7、nm色度值與PMI相關(guān)回歸方程分別：Y=1.12X+2.47(R2=0.6753)，Y=1.5X+5.5(R2=0.7260)；死后24-72h，80%乙醇固定-萃取液與茚三酮顯色后570nm處吸光度與PMI相關(guān)回歸方程：Y=0.011X-0.183(R2=0.8139)，甲醛的無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論：
　　⑴基于生物組織死后變化是生物大分子-中分子-小分子-離子和元素的單向性降解過(guò)程，這是本實(shí)驗(yàn)中與茚三酮顯色的蛋白質(zhì)及其

8、降解產(chǎn)物時(shí)序性變化的機(jī)制，也是形態(tài)結(jié)構(gòu)變化的本質(zhì)，而結(jié)構(gòu)變化又決定生物力學(xué)指標(biāo)時(shí)序性變化，綜合構(gòu)成了本實(shí)驗(yàn)的尸體組織生物化學(xué)、形態(tài)學(xué)和生物力學(xué)檢測(cè)指標(biāo)推斷PMI的本-構(gòu)關(guān)系和構(gòu)-效關(guān)系的理論依據(jù)。
　?、瞥Ｒ?guī)甲醛和乙醇固定液，可以在尸檢取材時(shí)，立即終止導(dǎo)致組織結(jié)構(gòu)破壞的自溶腐敗，同時(shí)具有增效性，即提高組織生物力學(xué)性狀、延長(zhǎng)檢測(cè)時(shí)限、獲得更大生物力學(xué)參數(shù)時(shí)序性差異，其中，甲醛固定的組織生物力學(xué)性狀推斷PMI相關(guān)方程比乙醇的好。