急性重型顱腦外傷患者血清差異性蛋白應(yīng)用研究.pdf

1、目的：篩選對(duì)比出急性顱腦外傷患者與正常對(duì)照之間以及不同傷情之間血清的差異蛋白質(zhì)，評(píng)價(jià)血清蛋白標(biāo)記物的意義，并利用血清中的差異性蛋白研究腦損傷急性期的病理生理機(jī)制，以達(dá)到指導(dǎo)臨床治療的目的。 方法：1.實(shí)驗(yàn)分組：(1)實(shí)驗(yàn)組：50例，均為顱腦外傷患者，男28例，女22例，年齡21-59歲，平均年齡33.23±4.47歲。①病例納入與排除標(biāo)準(zhǔn)：有明確腦外傷病史，發(fā)病后24 h內(nèi)收治入院作為研究對(duì)象。近二周未服用影響血腦屏障通透性如激

2、素類(lèi)的藥物、無(wú)感染性疾病、無(wú)嚴(yán)重心、肝、腎疾病、不伴有免疫性疾病、血液系統(tǒng)疾病及惡性腫瘤，既往無(wú)嚴(yán)重神經(jīng)系統(tǒng)疾病病史。實(shí)驗(yàn)組根據(jù)腦外傷輕重程度分為輕中型組(GCS評(píng)分>8分)和重型組(GCS評(píng)分<8分)。②診斷方法：顱腦外傷的診斷：患者均有明確腦外傷病史，有臨床癥狀伴/不伴有神經(jīng)系統(tǒng)陽(yáng)性體征，影像學(xué)檢查主要依據(jù)頭顱CT(Computed tomography)明確顱內(nèi)傷情，按格拉斯哥昏迷分級(jí)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)組分組。③治療方法：所有患者發(fā)

3、病入院后根據(jù)傷情分類(lèi)分別予以藥物治療和手術(shù)治療。藥物治療包括營(yíng)養(yǎng)支持、防止并發(fā)癥、預(yù)防感染、維持內(nèi)環(huán)境和顱內(nèi)情況穩(wěn)定、營(yíng)養(yǎng)神經(jīng)治療。(2)對(duì)照組：由20名健康體檢者組成，男13例，女7例，年齡35-43歲，平均年齡38.48±2.84歲。2.實(shí)驗(yàn)方法：實(shí)驗(yàn)組于傷后24h內(nèi)抽取清晨空腹前臂靜脈血，對(duì)照組病例均于清晨靜息30分鐘后抽取空腹靜脈血。采用金屬親和表面蛋白芯片結(jié)合表面增強(qiáng)激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜技術(shù)檢測(cè)分析實(shí)驗(yàn)患者和正常對(duì)照血清蛋

4、白質(zhì)譜。3.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：利用Ciphergen Proteinchip3.0分析軟件對(duì)樣本進(jìn)行數(shù)據(jù)收集并計(jì)算其差異性，以變異系數(shù)(CV)值表示，設(shè)定CV<15％時(shí)，不同芯片之間的實(shí)驗(yàn)誤差為可接受范圍。采用Biomarker Wizard3.1軟件分析患者組和對(duì)照組血清蛋白指紋圖譜，設(shè)定有意義的蛋白質(zhì)峰出現(xiàn)頻率閾值為10％，分別設(shè)定5，2兩次信噪比(S/N)過(guò)濾。確定兩組間蛋白質(zhì)峰值比較時(shí)，對(duì)初步篩選的蛋白質(zhì)峰進(jìn)行t檢驗(yàn)，P<0.05的蛋

5、白質(zhì)峰差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果：1.70例樣本中具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的差異性蛋白質(zhì)峰23個(gè)(P<0.05)，其中差別具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的蛋白質(zhì)峰6個(gè)(P<0.01)。2.在23個(gè)差異性蛋白質(zhì)峰中質(zhì)荷比(m/z)為7248.79、7229.21、2368.58、2099.08、2079.11的實(shí)驗(yàn)型蛋白質(zhì)峰與正常對(duì)照組比較表達(dá)降低；質(zhì)荷比(m/z)為6087.40、8.545.08、7307.32、7355.51、4630.20、8.

6、596.66、7748.80、8908.88的實(shí)驗(yàn)組蛋白質(zhì)峰與正常對(duì)照組比較表達(dá)增高，其中質(zhì)荷比(m/z)為6087.40、8545.08、4630.20三個(gè)具有顯著差異性的蛋白質(zhì)峰通過(guò)Swiss-Prot數(shù)據(jù)庫(kù)搜索，鑒定其分別為金屬硫蛋白-1F、熱休克蛋白結(jié)合因子-1和膽囊收縮素。3.50例患者樣本(重型組、輕中型組)同法比較可發(fā)現(xiàn)7個(gè)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的蛋白質(zhì)峰(P<0.05)，其中質(zhì)荷比(m/z)為4486.62、5411.67、68

7、30.30、6509.23、6330.25的重型組蛋白質(zhì)峰與輕中型組比較表達(dá)降低；質(zhì)荷比(m/z)為36523.61、35827.18的重型組蛋白質(zhì)峰與輕中型組比較表達(dá)增高，差別具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的蛋白質(zhì)峰1個(gè)(P<0.01)，并通過(guò)Swiss-Prot數(shù)據(jù)庫(kù)搜索，鑒定為類(lèi)固醇5α還原酶。 結(jié)論：1.急性腦外傷患者和健康體檢者，以及不同程度腦損傷患者血清蛋白質(zhì)表達(dá)均有差異性，通過(guò)表面增強(qiáng)激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜技術(shù)可以快速、準(zhǔn)確

8、地找到急性顱腦外傷患者血清中的差異性蛋白，為腦外傷研究提供一種新的方法，2.腦外傷患者傷后急性期有23個(gè)蛋白質(zhì)表達(dá)異常，在3個(gè)表達(dá)明顯異常的蛋白質(zhì)中，金屬硫蛋白和膽囊收縮素具有神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)作用，而熱休克蛋白結(jié)合因子則能加重繼發(fā)性腦損傷；重型與輕中型腦損害比較有7個(gè)蛋白質(zhì)表達(dá)異常，其中類(lèi)固醇5α還原酶表達(dá)明顯異常，不利于神經(jīng)保護(hù)和恢復(fù)。3.腦外傷差異性蛋白的發(fā)現(xiàn)和鑒定，從蛋白水平為腦損傷患者急性期分子機(jī)理、病理生理學(xué)研究提供了客觀依據(jù)，對(duì)