FoxO1-shRNA干擾質(zhì)粒對水通道蛋白9在正常人肝細(xì)胞中表達(dá)的影響.pdf

1、目的:觀察FoxO1基因沉默對水通道蛋白9(AQP9)在正常人肝細(xì)胞L-02中表達(dá)的影響。
　　 方法:將4條特異性干擾質(zhì)粒FoxO1-shRANA1～4經(jīng)脂質(zhì)體法瞬時轉(zhuǎn)染L-02細(xì)胞,熒光顯微鏡下觀察轉(zhuǎn)染效率,篩選沉默效率最佳的一條質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)染肝細(xì)胞,經(jīng)RT-PCR法檢測其對AQP9基因表達(dá)的影響;細(xì)胞免疫熒光、Western blot法檢測其對AQP9蛋白表達(dá)的影響;并在轉(zhuǎn)染后不同時間點收集細(xì)胞,實時熒光定量PCR檢測轉(zhuǎn)染后

2、FOXO1抑制AQP9轉(zhuǎn)錄表達(dá)的時間譜。
　　 結(jié)果:4條特異性干擾質(zhì)粒FoxO1-shRNA1～4均有不同程度的沉默效果,其中以FoxO1-shRNA2沉默效果最佳,與對照組相比,AQP9在L-02細(xì)胞中的mRNA及蛋白水平的表達(dá)水平下降差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);定量PCR檢測顯示,AQP9的表達(dá)隨轉(zhuǎn)染時間的延長而降低,在轉(zhuǎn)染后60 h達(dá)抑制峰值,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:FoxO1基因沉