二氧化硫?qū)ν明膭?dòng)脈再狹窄模型的保護(hù)作用.pdf

1、目的：
　　本實(shí)驗(yàn)通過(guò)制備新西蘭兔髂動(dòng)脈的再狹窄模型，觀(guān)察動(dòng)物模型體內(nèi)SO2的表達(dá)水平，以及髂動(dòng)脈的病理改變，并加用SO2外源性供體Na2SO3/NaHSO3，以探討SO2在再狹窄發(fā)生及發(fā)展過(guò)程中的變化及其與再狹窄的可能內(nèi)在關(guān)聯(lián)及其對(duì)PCI術(shù)后再狹窄的可能的防治作用。
　　研究方法：
　　1、制備球囊損傷致髂動(dòng)脈再狹窄模型：將30只新西蘭雄兔，隨機(jī)分成三組，即正常對(duì)照組、再狹窄模型組及 SO2干預(yù)組。適應(yīng)性飼喂7天普飼

2、后，取后兩組新西蘭兔實(shí)施球囊損傷術(shù)，術(shù)后連續(xù)飼喂再狹窄模型組及 SO2干預(yù)組高脂飼料4周，再次對(duì)再狹窄模型組及 SO2干預(yù)組行球囊損傷術(shù)，手術(shù)后繼續(xù)飼喂再狹窄模型組及 SO2干預(yù)組高脂飼料，術(shù)后第3天 SO2干預(yù)組開(kāi)始腹腔注射N(xiāo)a2SO3/NaHSO3新鮮混合液（摩爾比Na2SO3：NaHSO3=3：1，溶于1 moL/L的9 g／L鹽水中，pH7.4，32.85mg/kg·d）。4周后處死實(shí)驗(yàn)新西蘭兔，處死前抽取靜脈血30ml以測(cè)定各

3、項(xiàng)指標(biāo)，處死后留取髂動(dòng)脈標(biāo)本。
　　2、靜脈血處理：所有靜脈血標(biāo)本均測(cè)取谷丙轉(zhuǎn)氨酶（GPT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（GOT）、膽固醇（CHO）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白（HDL）、低密度脂蛋白（LDL）、極低密度脂蛋白（VLDL）、C反應(yīng)蛋白（CRP）含量，取血清測(cè)取SO2、NO、一氧化氮合酶（NOS）、丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD）濃度。
　　3、標(biāo)本處理：留取的雙側(cè)髂動(dòng)脈標(biāo)本進(jìn)行HE及免疫組化染色處理；采用RT-

4、PCR技術(shù)半定量測(cè)定髂動(dòng)脈組織勻漿中GOT1及GOT2 mRNA的表達(dá)水平；于-80℃冰箱中凍存剩余血管組織。
　　結(jié)果：
　　采用本造模方法后，再狹窄模型組及SO2干預(yù)組的新西蘭兔存活16只，存活率80％，新西蘭兔處死后均可以觀(guān)察到動(dòng)脈內(nèi)膜的增生，造模成功。
　　1、血清學(xué)指標(biāo)：再狹窄模型組及SO2干預(yù)組較正常對(duì)照組GOT水平下降（p<0.05），再狹窄模型組低于SO2干預(yù)組（p<0.05）；再狹窄模型組及SO2干預(yù)

5、組較正常對(duì)照組CHO、HDL、LDL、VLDL、CRP水平升高（p<0.05），于CRP指標(biāo)SO2干預(yù)組低于再狹窄模型組（p<0.05），于 CHO、HDL、LDL、VLDL指標(biāo) SO2干預(yù)組略低于再狹窄模型組，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p>0.05)；再狹窄模型組與SO2干預(yù)組較正常對(duì)照組相GPT與TG略有增加，但無(wú)顯著差異(p>0.05)。血清SO2含量，SO2干預(yù)組高于再狹窄模型組(p<0.05),較正常對(duì)照組略增高，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p>

6、0.05）；血清NO和eNOS含量再狹窄模型組低于SO2干預(yù)組及正常對(duì)照組（p<0.05,p<0.05），SO2干預(yù)組低于正常對(duì)照組（p<0.05）；TNOS含量再狹窄模型組高于SO2干預(yù)組及正常對(duì)照組（p<0.05,p<0.05）；SO2干預(yù)組高于正常對(duì)照組（p<0.05）；MDA含量再狹窄模型組高于SO2干預(yù)組及正常對(duì)照組（p<0.05,p<0.05），SO2干預(yù)組高于正常對(duì)照組（p<0.05）；SOD含量再狹窄模型組低于SO2干預(yù)

7、組及正常對(duì)照組（p<0.05,p<0.05），SO2干預(yù)組低于正常對(duì)照組（p<0.05）。
　　2、組織學(xué)變化：正常對(duì)照組的血管管壁質(zhì)地柔軟，呈粉紅色，HE染色顯示內(nèi)膜主要成分為單層內(nèi)皮細(xì)胞與內(nèi)彈力板，中膜平滑肌細(xì)胞環(huán)繞管腔規(guī)則排列；再狹窄模型組血管管壁呈白色，質(zhì)堅(jiān)韌且厚度增加，血管管腔內(nèi)徑變窄，HE染色表現(xiàn)為血管內(nèi)膜明顯增厚，其下含大量增生的血管平滑肌細(xì)胞，內(nèi)彈力板斷裂，中膜處血管平滑肌細(xì)胞大量增生。SO2干預(yù)組血管質(zhì)地稍軟且管

8、腔增大，管壁粉白色，HE染色也有不同程度的內(nèi)膜增厚，較多平滑肌細(xì)胞包含其中，內(nèi)彈力板較完整，中膜亦有增生的血管平滑肌細(xì)胞，但較再狹窄模型組其管腔狹窄程度及內(nèi)膜增生程度降低。通過(guò)免疫組化a-平滑肌肌動(dòng)蛋白（a-SMA）染色提示血管平滑肌細(xì)胞是增生內(nèi)膜的主要細(xì)胞組分。在低倍顯微鏡觀(guān)察測(cè)量三組新生內(nèi)膜的厚度：與正常對(duì)照組（2.9458±0.1646）對(duì)比，再狹窄模型組（216.9599±63.7715）、SO2干預(yù)組（88.3928±22.8

9、663）血管內(nèi)膜明顯增厚（p<0.05），SO2干預(yù)組內(nèi)膜較再狹窄模型組變薄(p<0.05)。PCNA染色顯示SO2干預(yù)組（20.57±4.07）及再狹窄模型組（41.74±6.52）表達(dá)明顯高于正常對(duì)照組（14.17±3.65）（p<0.05），而再狹窄模型組與SO2干預(yù)組對(duì)比表達(dá)明顯增高（p<0.05）。
　　3、RT-PCR：GOT1及 GOT2mRNA表達(dá)水平在再狹窄模型組顯著高于其他兩組（p值均<0.05）；SO2干預(yù)組

10、 GOT1mRNA表達(dá)量略低于空白對(duì)照組，但無(wú)顯著差異（p>0.05），而GOT2mRNA表達(dá)量則降低（p<0.05）。
　　結(jié)論：
　　1、本研究采用聯(lián)合高脂飼料和兔髂動(dòng)脈二次球囊損傷方法可成功復(fù)制再狹窄模型，縮短建模周期，可行性高。
　　2、再狹窄的可能發(fā)生機(jī)制為：PCI術(shù)后致血管內(nèi)皮受損，致eNOS活性降低，NO生成量減少；內(nèi)皮抗氧化還原能力受損，SOD活性或生成降低；內(nèi)皮受損處發(fā)生炎癥反應(yīng)并釋放一系列炎癥因子。

11、NO含量下降、SOD活性的降低及炎癥因子的釋放進(jìn)而引起細(xì)胞間信息、能量及物質(zhì)交換增加，VSMC表型改變、增殖遷移，促進(jìn)以VSMC為主要細(xì)胞組分的新生內(nèi)膜增殖。同時(shí)SOD活性降低，以及iNOS生成增加，可引起機(jī)體氧自由基數(shù)目增多，脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)加強(qiáng)，MDA等脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物生成增多并加重內(nèi)皮細(xì)胞損傷，最終導(dǎo)致了再狹窄發(fā)生。而SO2可能通過(guò)提高eNOS活性，增加NO的釋放；增加機(jī)體SOD的含量，減少iNOS生成，降低MDA水平，抑制脂質(zhì)過(guò)氧化