2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、前言:
   耳腎毒性作為藥物的副作用影響著一些臨床藥物的應(yīng)用。產(chǎn)生耳、腎毒性的藥物包括腫瘤化療藥(順鉑)、非類(lèi)固醇抗炎鎮(zhèn)痛藥(阿司匹林)、氨基糖苷類(lèi)抗生素(鏈霉素、卡那霉素、新霉素、慶大霉素)等。慶大霉素(Gentamincin,GM)是一種氨基糖苷類(lèi)抗生素(Aminoglycoside antibiotics,AmAn),由Weinstein于1963年發(fā)現(xiàn),可通過(guò)全程阻斷細(xì)菌蛋白質(zhì)合成影響細(xì)胞膜通透性而對(duì)需氧革蘭陰性桿菌起

2、到抑菌或殺菌作用。90%以上的GM不經(jīng)肝臟代謝而以原有的形態(tài)從腎小管尤其是近曲小管排出。其副作用主要是對(duì)內(nèi)耳耳蝸、前庭和腎臟的損傷,毒性機(jī)制尚不完全清楚。GM中毒性耳聾的發(fā)病機(jī)制包括自由基損傷學(xué)說(shuō)[1]、內(nèi)耳微循環(huán)障礙學(xué)說(shuō)[2]、毛細(xì)胞線(xiàn)粒體功能失常學(xué)說(shuō)和細(xì)胞凋亡[3,4]等。
   為進(jìn)一步探討上述機(jī)制,本研究采用肌肉注射GM構(gòu)建大鼠耳腎毒性模型。前期研究應(yīng)用Affymetrix2302.0大鼠全基因組芯片獲得了GM給藥組和正

3、常對(duì)照組新生大鼠耳、腎和肝組織基因差異表達(dá)譜,并對(duì)耳腎毒性的相關(guān)基因進(jìn)行了分析。經(jīng)分析發(fā)現(xiàn)涉及免疫反應(yīng)、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞壞死等過(guò)程的基因表達(dá)出現(xiàn)了上調(diào)或下調(diào),與耳腎毒性相關(guān)的基因有21個(gè),其中CHOP即DNA損傷誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄因子3(DNA-damage inducible transcription3,Ddit3)的表達(dá)發(fā)生上調(diào)。
   CHOP為內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(endoplasmic reticulum stress,ERS)特異性轉(zhuǎn)錄

4、因子,在哺乳動(dòng)物體內(nèi)廣泛表達(dá)。生理?xiàng)l件下,CHOP主要存在于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中,含量較低。發(fā)生ERS時(shí),CHOP被大量誘導(dǎo)表達(dá)并聚集于細(xì)胞核內(nèi),引發(fā)細(xì)胞凋亡,該過(guò)程是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的細(xì)胞凋亡途徑。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)是細(xì)胞內(nèi)蛋白合成、折疊、修飾和分泌的場(chǎng)所。在生理?xiàng)l件下,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)負(fù)載的蛋白和其折疊能力處于平衡狀態(tài)。當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)合成過(guò)多時(shí),未折疊蛋白聚集,鈣離子平衡和氧化還原反應(yīng)受到破壞,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)穩(wěn)態(tài)失衡,從而誘發(fā)ERS[5]。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)通過(guò)激活未折疊蛋白反應(yīng)(unfolded

5、 proteinresponse,UPR)來(lái)抵抗ERS引起的細(xì)胞損傷[6],恢復(fù)細(xì)胞功能。但損傷持續(xù)或過(guò)于嚴(yán)重時(shí),內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)將不能及時(shí)恢復(fù),并可能引起細(xì)胞凋亡。
   本研究通過(guò)探討CHO等ERS相關(guān)基因在GM所致大鼠耳腎毒性組織中的表達(dá)情況,討論內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激引起的凋亡在耳腎毒性中的作用。
   材料與方法:
   一、實(shí)驗(yàn)材料
   1、健康新生Wistar大鼠40只
   2、HE染色相關(guān)試劑<

6、br>   3、肌酐和尿素氮檢測(cè)相關(guān)試劑
   4、Western B1ot相關(guān)試劑
   5、Real-time PCR實(shí)驗(yàn)相關(guān)試劑
   6、免疫組化及TUNEL相關(guān)試劑
   二、實(shí)驗(yàn)方法
   1、新生大鼠隨機(jī)分組,肌肉注射GM一周后,取耳蝸和腎組織。
   2、通過(guò)尿素氮肌酐檢測(cè)判斷腎損傷程度,HE染色查看組織水平的耳腎損傷程度。
   3、運(yùn)用Real-time PC

7、R技術(shù)驗(yàn)證CHO基因等內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)基因在耳腎組織中的表達(dá)情況。通過(guò)Western Blot技術(shù),檢測(cè)CHOP蛋白表達(dá)情況。
   4、采用免疫組化和TUNEL對(duì)組織中CHOP表達(dá)情況及細(xì)胞凋亡情況進(jìn)行評(píng)估。
   實(shí)驗(yàn)結(jié)果:
   1、GM誘導(dǎo)的耳蝸和腎組織中,CHOP在腎的高劑量組和耳蝸的中、高劑量組中表達(dá)上調(diào),內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)基因的表達(dá)發(fā)生變化。
   2、CHOP蛋白表達(dá)升高與凋亡并存。
  

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