抗重金屬鉛離子mAb的制備及ELISA檢測(cè)方法的建立.pdf

1、鉛是的用處極廣，同時(shí)也是對(duì)人類危害最大的重金屬。近年來，鉛的污染問題日益嚴(yán)重，遭受其危害的人數(shù)也越來越多。鉛對(duì)機(jī)體毫無益處，對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)、生殖系統(tǒng)、消化系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)等都有毒害作用。由于重金屬傳統(tǒng)檢測(cè)方法的諸多弊端，本論文利用免疫學(xué)分析技術(shù)制備出抗鉛離子單克隆抗體，研制出鉛離子檢測(cè)試劑盒，建立了重金屬鉛離子快速檢測(cè)體系。
　　通過異硫氰酯法將鉛離子和蛋白分子（BSA/OVA）偶聯(lián)到雙功能偶聯(lián)劑ITCBE上，制備出人工抗原

2、Pb2+-ITCBE-BSA和Pb2+-ITCBE-OVA，并通過包括紫外分光光度法、ICP-AES法、SDS-PAGE、免疫鼠多抗血清ELISA鑒定，證明人工抗原制備成功。其結(jié)果為：Pb2+-ITCBE-BSA和Pb2+-ITCBE-OVA的蛋白濃度分別為5.26mg/mL、6.90 mg/mL，其Pb2+含量分別為46.14mg/L、18.60mg/L；Pb2+-ITCBE-BSA免疫小鼠后效價(jià)達(dá)到1：1.024×105，阻斷ELI

3、SA檢測(cè)到多抗血清對(duì)Pb2+的半數(shù)抑制濃度IC50為25.88ng/mL，與其他重金屬離子基本上無交叉反應(yīng)。
　　用Pb2+-ITCBE-BSA免疫5只Balb/C小鼠，通過ELISA檢測(cè)多抗血清的方法挑選出最優(yōu)小鼠，取其脾臟與NS0細(xì)胞進(jìn)行融合。通過ELISA法對(duì)雜交瘤細(xì)胞上清液進(jìn)行檢測(cè)后，篩選出1B7F4，2G5A2，2B7C11三株對(duì)Pb2+敏感特異的單克隆雜交瘤細(xì)胞株。運(yùn)用體外誘生腹水法大量制備抗重金屬Pb2+單克隆抗體。

4、其結(jié)果為：1B7F4，2G5A2，2B7C11三株單抗細(xì)胞株上清液ELISA檢測(cè)效價(jià)分別為1：2.56×103、1：1.28×103、1：2.56×103，IC50分別為37.068ng/mL、45.081ng/mL、34.276ng/mL，其同種型鑒定結(jié)果分別為IgG1/κ、IgG1/λ、IgG2a/κ，與其他重金屬基本上無交叉反應(yīng)。其中特異性最好的2B7C11單抗細(xì)胞株親和常數(shù)Ka為2.69×109，腹水效價(jià)為1：1.6384×10