大鼠門脈系統(tǒng)不同血供對肝再生的影響——輔助肝移植治療門靜脈血供方式的探討.pdf

1、背景及目的：輔助肝移植是一種治療急性肝功能衰竭擁有良好前景的手段，其具有保留原肝再生機(jī)會、可能避免免疫抑制劑的長期應(yīng)用等優(yōu)點(diǎn)。然而，輔助肝如何重建門靜脈系統(tǒng)的血流一直存在爭議，通常應(yīng)用的是供體門靜脈與受體門靜脈主干的端側(cè)吻合。然而，其存在門靜脈血流競爭、吻合口血栓發(fā)生機(jī)率高等問題。為了不干擾宿主肝臟的門靜脈血供，近年有學(xué)者提出輔助肝臟門靜脈動脈化或者左腎靜脈化，并有零星的個案報道。究竟輔助肝移植門靜脈的血供采用何種方式更為合理，值得深入

2、研究。本研究觀察SD大鼠90％肝切除誘導(dǎo)急性肝功能衰竭時，不同門靜脈血內(nèi)毒素水平的變化，了解腸源性內(nèi)毒素的入血途徑；探討同一大鼠體內(nèi)門靜脈分支接受不同血流（門靜脈血、動脈血）對肝臟再生的影響，明確腸腔分流及門靜脈動脈化輔助肝在肝切除急肝衰中的意義；論證腸系膜靜脈供血的輔助肝移植治療急性肝功能衰竭的可行性。
　　 方法：
　　 1.建立90％肝切除誘導(dǎo)急性肝功能衰竭大鼠模型，并以70％肝切除和假手術(shù)為對照，觀察術(shù)后大鼠生

3、存情況，不同時間點(diǎn)（6h、12h、18h、24h）肝功能、血氨及TNF-α變化；不同部位血液（腸系膜靜脈血、脾靜脈血和外周血）內(nèi)毒素水平；肝臟及腸道組織病理改變。
　　 2.建立半肝門靜脈動脈化大鼠模型，并設(shè)立全肝門靜脈動脈化及假手術(shù)作為對照，對比觀察術(shù)后不同時間點(diǎn)（3d、7d、2w）肝功能、血氨，不同肝葉重量，肝臟病理，投射電鏡，以及肝細(xì)胞Ki67和Caspase-3免疫組化染色結(jié)果。
　　 3.建立模擬95％肝切

4、除+半肝門靜脈動脈化+腸腔分流(95％PHHPVA+MCS)的大鼠模型，并以95％肝切除(95％PH)、95％肝切除+腸腔分流(95％PH+MCS)以及模擬95％肝切除+半肝門靜脈動脈化(95％PH+HPVA)大鼠作為對照。觀察術(shù)后大鼠生存情況，不同時間點(diǎn)肝功能、血氨、內(nèi)毒素水平，不同肝葉重量，肝臟病理，以及肝細(xì)胞Ki67免疫組化染色結(jié)果。
　　 4.建立腸系膜靜脈供血的輔助肝移植(ALT-MVBS)大鼠模型，并以90％肝切除

5、大鼠作為對照，觀察術(shù)后大鼠生存情況；宿主肝臟和輔助肝臟的重量變化及病理轉(zhuǎn)歸。
　　 5. 統(tǒng)計學(xué)處理：應(yīng)用SPSS16.0軟件進(jìn)行單因素方差分析、秩和檢驗(yàn)、生存分析等，P<0.05判定為有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 結(jié)果：
　　 1.90％肝切除組大鼠在術(shù)后28-51小時內(nèi)死亡，術(shù)后生存情況顯著差于假手術(shù)組和70％肝切除組(u=12.746，P=0.002)。90％肝切除組術(shù)后隨時間推移，血清ALT、AST、ALP、血氨

6、均逐漸升高，而白蛋白逐漸下降。70％肝切除組術(shù)后24h和90％肝切除組術(shù)后6 h、12h，腸系膜靜脈血內(nèi)毒素水平顯著高于脾靜脈血和外周靜脈血。90％肝切除組術(shù)后隨時間的推移，血清TNF-α逐步升高；腸系膜靜脈、脾靜脈血和外周血內(nèi)毒素水平與外周血TNF-α水平均具有顯著的相關(guān)性（P<0.001），其中腸系膜靜脈血的相關(guān)系數(shù)最高，達(dá)到0.933。90％肝切除組，術(shù)后可見肝組織損害，肝小葉結(jié)構(gòu)模糊，血竇呈彌漫性或局灶性擴(kuò)張，肝細(xì)胞變性、壞死，

7、門脈區(qū)有炎性細(xì)胞浸潤。大鼠回腸粘膜固有層變薄，部分上皮細(xì)胞變性脫落，絨毛水腫增粗，排列紊亂，高度縮短，淋巴細(xì)胞增多。
　　 2.半肝門靜脈動脈化組、全肝門靜脈動脈化組及假手術(shù)組大鼠均獲得良好存活。術(shù)后7d和2w時，全肝門靜脈動脈化組血氨顯著高于另兩組。全肝門靜脈動脈化術(shù)后，大鼠各葉肝臟重量/鼠重與假手術(shù)組對比，均無明顯變化。半肝門靜脈動脈化術(shù)后，全肝重量/鼠重（TLW/RW）術(shù)后各時間點(diǎn)（3天、7天、2周）與假手術(shù)組均無顯著差異

8、；右肝重/鼠重（RLW/RW）隨時間推移逐漸升高，而左+中肝重/鼠重[(L+M) LW/RW]逐漸下降（P值均<0.05）。術(shù)后3d和7d時，半肝門靜脈動脈化組右半肝的肝細(xì)胞Ki67陽性率顯著高于其他各組（P<0.05），而半肝門靜脈動脈化的左半肝術(shù)后均低于其他各組。術(shù)后各時間點(diǎn)（3d、7d、2w），半肝門靜脈動脈化組左肝肝細(xì)胞Caspase-3陽性率顯著高于其他各組，P<0.05；其中以術(shù)后7天時達(dá)到最高。透射電鏡顯示，半肝門靜脈動脈

9、化術(shù)后左肝可見較多肝細(xì)胞凋亡，隨時間推移，逐漸加重。
　　 3.模擬95％PH+HPVA+MCS組生存時間顯著長于模擬95％PH+HPVA組，而模擬95％PH+HPVA組又顯著長于95％PH組和95％PH+MCS組（u=17.347，P=0.001。）。術(shù)后48h和72h時，與模擬95％PH+HPVA組相比，模擬95％PH+HPVA+MCS組的ALT、 AST、ALP、TB和血NH3均顯著降低，ALB顯著升高。模擬95％PH+H

10、PVA組，術(shù)后隨時間的推移，ALT、 AST、ALP、TB和血NH3逐漸升高，而ALB逐漸下降。模擬95％PH+HPVA+MCS組，術(shù)后隨時間推移，ALT、 AST、ALP、TB和血NH3逐漸下降，而ALB逐漸升高。門靜脈血和外周血內(nèi)毒素水平對比，僅在模擬95％PH+HPVA組術(shù)后24時，門靜脈內(nèi)毒素水平顯著高于外周血水平，而其他各組對比無顯著差異。術(shù)后24h，95％PH組和95％PH+MCS組的門靜脈和外周血內(nèi)毒素水平均顯著高于模擬9

11、5％PH+HPVA組和模擬95％PH+HPVA+MCS組，而模擬95％PH+HPVA組又顯著高于模擬95％PH+HPVA+MCS組。模擬95％PH+HPVA組術(shù)后隨時間推移，門靜脈和外周血內(nèi)毒素水平逐漸升高，而模擬95％PH+HPVA+MCS組術(shù)后內(nèi)毒素水平基本穩(wěn)定。模擬95％PH+HPVA+MCS組三角葉/鼠重的比值隨時間推移逐漸升高。術(shù)后48h和72h時，模擬95％PH+HPVA+MCS組三角葉/鼠重的比值均顯著高于模擬95％PH+

12、HPVA組。模擬95％PH+HPVA+MCS組術(shù)后前3天（24h、48h、72h）（左+中葉）/鼠重的比值亦無顯著差異，而術(shù)后7d時顯著降低。術(shù)后各時間點(diǎn)（24h、48h、72h），模擬95％PH+HPVA+MCS組三角葉肝臟肝細(xì)胞Ki67陽性率顯著高于模擬95％PH+HPVA組。術(shù)后24h，模擬95％PH+HPVA+MCS組左葉+中葉肝臟肝細(xì)胞Ki67陽性率顯著高于模擬95％PH+HPVA組。
　　 4.90％肝切除組10只S

13、D大鼠術(shù)后25-46小時內(nèi)全部死亡（0/10）；90％肝切除組+腸系膜上靜脈異位輔助肝移植（90％PH+ALT-MVBS）2周組10只大鼠存活率8/10。90％PH+ALT-MVBS 生存情況顯著好于90％肝切除組(u=15.752, P<0.001)。90％PH+ALT-MVBS術(shù)后3天，ALT、 AST、ALP均顯著高于假手術(shù)組、7天組和2周組（P<0.05），而ALB顯著低于其他各組（P<0.05）。TB、血氨各組間無顯著差異。9

14、0％PH+ALT-MVBS組術(shù)后宿主肝臟/鼠重的比值逐漸升高，而輔助肝臟/鼠重的比值逐漸下降。
　　 結(jié)論：
　　 1.90％肝切除能夠成功誘導(dǎo)急性肝功能衰竭。進(jìn)行性加重的內(nèi)毒素血癥是導(dǎo)致其肝功能衰竭的重要環(huán)節(jié)。通過腸系膜靜脈回流是腸源性內(nèi)毒素進(jìn)入血液循環(huán)的主要途徑之一。
　　 2.在同一大鼠體內(nèi)，門靜脈動脈化的肝臟由于無法獲得門靜脈系統(tǒng)血供，術(shù)后門靜脈動脈化的肝臟逐漸萎縮，而獲得門靜脈血供的肝臟逐漸增生。實(shí)驗(yàn)結(jié)