腸道菌群失衡前后小鼠派氏結(jié)內(nèi)T淋巴細(xì)胞亞群分析及功能變化的研究.pdf

1、目的:
　　 通過分析小鼠腸道菌群失衡前后派氏結(jié)(Peyer'spatches，PP)內(nèi)T淋巴細(xì)胞及亞群數(shù)量以及細(xì)胞因子表達(dá)的變化，闡明菌群失衡對小鼠派氏結(jié)內(nèi)T淋巴細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能的影響。
　　 方法:
　　 1.沿用抗生素頭孢曲松鈉灌胃的方法建立小鼠腸道菌群失衡模型。以頭孢曲松鈉終濃度為8g/kg/d劑量，連續(xù)灌胃8天，建立小鼠重度菌群失衡模型;以頭孢曲松鈉終濃度為4g/kg/d劑量，連續(xù)灌胃4天，建立小鼠輕度菌

2、群失衡模型。
　　 2.利用EDTA振蕩法去上皮和膠原酶Ⅳ消化法制備正常組、輕度菌群失衡組、重度菌群失衡組小鼠腸派氏結(jié)總單細(xì)胞懸液。以本管未添加抗體細(xì)胞作為陰性對照，調(diào)整細(xì)胞濃度為106個/管，三聯(lián)熒光抗體標(biāo)記流式細(xì)胞術(shù)檢測T淋巴細(xì)胞CD3+、CD4+、CD8+和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞CD4+CD25+的變化，并計算CD4/CD8比值。
　　 3.利用RT-PCR法檢測正常組、輕度菌群失衡組和重度菌群失衡組派氏結(jié)內(nèi)Th1類淋巴細(xì)胞

3、分泌的IL-2、IFN-γ和Th2類淋巴細(xì)胞分泌的IL-4、IL-10mRNA表達(dá)量的變化。
　　 結(jié)果:
　　 1.與正常組比較，輕度組和重度組派氏結(jié)內(nèi)總CD3+T細(xì)胞比例上升(p＜0.05)，CD4+T細(xì)胞比例上升(p＜0.05);CD8+T細(xì)胞比例下降(p＜0.05);CD4/CD8比值升高(p＜0.05);CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞比例減少(p＜0.05)。
　　 2.通過RT-PCR法對各細(xì)胞因子m

4、RNA表達(dá)量的變化檢測，與正常組比較，輕度組和重度組中Th1類細(xì)胞分泌的IL-2和IFN-γ的表達(dá)量減少，Th2類細(xì)胞分泌的IL-4和IL-10的表達(dá)量逐漸升高。
　　 結(jié)論:
　　 1.腸道優(yōu)勢菌群失衡導(dǎo)致派氏結(jié)內(nèi)T淋巴細(xì)胞構(gòu)成比例發(fā)生變化，其中總T淋巴細(xì)胞比例隨著失衡程度的加深不斷升高，輔助性T細(xì)胞比例較失衡前升高，細(xì)胞毒性T細(xì)胞和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞比例降低。
　　 2.腸道優(yōu)勢菌群失衡導(dǎo)致派氏結(jié)內(nèi)與體液免疫相關(guān)的