半枝蓮黃酮抗乙肝病毒活性成分篩選及化學(xué)成分研究.pdf

1、半枝蓮（Scutellaria barbata D.Don），是我國(guó)少數(shù)民族的常用中草藥材，主要化學(xué)成分為黃酮類(lèi)、二萜類(lèi)和生物堿等，具有突出的抗菌、消炎、抗病毒及抗腫瘤等功能，現(xiàn)在多單用或者與其他藥組成復(fù)方，常被用于治療肝炎、肝硬化、肝癌等肝臟疾病。目前國(guó)內(nèi)外對(duì)于半枝蓮的藥理作用研究多集中于抗癌、保肝等作用機(jī)制的研究，而對(duì)于用傳統(tǒng)的植物化學(xué)研究方法，利用藥理模型對(duì)半枝蓮進(jìn)行抗乙型肝炎病毒生物活性研究，追蹤藥材有效部位并研究抗乙型肝炎機(jī)制

2、的研究較少。本論文對(duì)半枝蓮體外抗乙肝病毒活性進(jìn)行了較為系統(tǒng)性的研究。實(shí)驗(yàn)研究?jī)?nèi)容包括以下三個(gè)方面。
　　1.半枝蓮總黃酮的提取與分離及含量測(cè)定。根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)初選結(jié)果，醇提液的抗乙肝病毒效果較好，進(jìn)一步根據(jù)水提醇沉法精制半枝蓮總黃酮，去除有機(jī)酸等雜質(zhì)。通過(guò)分光光度法測(cè)定半枝蓮醇提液中總黃酮含量為（54.24±3.74）％，醇提液經(jīng)精制后總黃酮含量為（85.23±2.90）％。根據(jù)總黃酮中黃酮各個(gè)單體極性的差異，分別用不同體積分?jǐn)?shù)的乙醇

3、-水溶液經(jīng)過(guò)大孔樹(shù)脂洗脫，獲得分別為0％、20％、40％、60％、80％不同乙醇體積分?jǐn)?shù)的洗脫液。
　　2.高效液相同時(shí)測(cè)定半枝蓮的9種黃酮單體分析方法的建立。高效液相色譜同時(shí)測(cè)定野黃芩苷(scutellarin)、黃芩苷(baicalin)、野黃芩素(scutellarein)、槲皮素(quercetindihydrate)、木犀草素(luteolin)、柚皮素（naringenin）、芹菜素（apigenin）、黃芩素(bai

4、calein)、漢黃芩素(wogonin)9種黃酮單體的色譜條件為:Wondasil C18色譜柱（250×4.6mm，5μm），流動(dòng)相A液1％的醋酸，B液為色譜甲醇和乙腈配比(80∶20)，梯度洗脫，流速0.8 mL/min;柱溫25℃，檢測(cè)波長(zhǎng)340nm，色譜分離梯度條件(min、B％):0～20 min,38％;20～30 min,38％-44％;30～40 min,44％-52％;40～50 min，52％-62％;50～55m

5、in，62％-80％;55～60 min，80％-38％。在此條件下能夠較好的將半枝蓮總黃酮中的9種單體分離開(kāi)來(lái)，精密度、重現(xiàn)性比較好，快速簡(jiǎn)單，可用于多種半枝蓮黃酮成分含量的測(cè)定。并測(cè)定不同體積分?jǐn)?shù)的乙醇經(jīng)大孔樹(shù)脂洗脫半枝蓮醇提液的各個(gè)不同洗脫部位中9種黃酮單體的含量結(jié)果顯示，不同體積分?jǐn)?shù)乙醇洗脫后的洗脫液中的單體含量有差異，20％洗脫部位主要含有野黃芩苷，40％洗脫部位主要含有黃芩苷和野黃芩素，60％洗脫部位主要含有芹菜素，80％洗

6、脫部位主要含有柚皮素等，半枝蓮黃酮主要集中在20％、40％、60％乙醇洗脫部位。
　　3.半枝蓮黃酮體外抗乙肝病毒活性部位的篩選。構(gòu)建以乙肝病毒感染的HepG2.2.15細(xì)胞作為體外抗乙肝病毒實(shí)驗(yàn)的模型，實(shí)驗(yàn)以半枝蓮的水煎液、醇提液、經(jīng)大孔樹(shù)脂以不同體積分?jǐn)?shù)的乙醇洗脫的各個(gè)部位、9種半枝蓮黃酮單體為供試藥物，實(shí)驗(yàn)方法為以MTT法觀察供試藥物對(duì)細(xì)胞的毒性作用;采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)方法測(cè)定HepG2.2.15細(xì)胞分泌到上

7、清液中的乙型肝炎HBsAg、HBeAg的抗原含量。以治療指數(shù)TI來(lái)判定各個(gè)部位及成分抗乙肝病毒的效果。結(jié)果顯示，半枝蓮醇提液對(duì)HBsAg、 HBeAg抗原的TI值分別為2.53和4.39;40％與60％洗脫部位效果較好，對(duì)HBsAg、 HBeAg抗原的TI值分別為3.43和5.87，以及2.46和4.67;黃芩素單體對(duì)HBsAg、HBeAg抗原的TI值分別為6.65和3.36。結(jié)果表明半枝蓮總黃酮具有一定的抗乙肝病毒作用，9種單體中野黃