核受體CAR在多環(huán)芳烴芘引起的肝毒性的作用機制研究.pdf

1、目的：多環(huán)芳烴是一類常見的持續(xù)性環(huán)境污染物，主要來源于有機物的不完全燃燒。當前人類暴露在各種含有多環(huán)芳烴的環(huán)境中，例如汽車尾氣、工業(yè)污水以及受污染的食物等。已有研究表明多環(huán)芳烴對人類的身體健康會產生嚴重的危害。芘是含有四個苯環(huán)的多環(huán)芳烴，在美國環(huán)境保護組織列出的16種優(yōu)先控制的PAHs污染物種類中所占比例較高。但是目前關于芘對動物機體產生毒性作用機制研究尚未出現(xiàn)比較完善的科學報道。組成型雄甾烷受體CAR是核受體超家族中的重要成員，能夠在

2、肝臟中高度表達，在動物機體受到外源或內源化合物入侵時，它能通過調節(jié)其靶基因的表達來控制這些物質在體內的代謝。本研究旨在說明核受體CAR在芘引起的肝毒性中的介導作用，為預防和降低芘的危害提供理論依據(jù)。
　　方法：選用8周大雄性的CAR基因敲除小鼠和其同窩出生的野生型小鼠（C57BL/6）作為實驗動物，根據(jù)體重隨機分組，對照組灌胃玉米油，實驗組灌胃兩種劑量的芘（150和300 mg/kg/day），連續(xù)4天灌胃后第5天處死小鼠。為了探

3、究核受體CAR是否能夠被芘激活，本實驗還以小鼠單次腹腔注射3 mg/kg的TCPOBOP作為陽性對照。斷頭處死小鼠，收集血液，離心得上清，測定血清中ALT含量。解剖小鼠取得肝臟，將一小塊肝臟組織浸泡在10％的中性福爾馬林緩沖液中，用石蠟包埋，蘇木精和伊紅染色后進行病理切片觀察。抽提肝組織總RNA并反轉錄成cDNA，采用熒光定量PCR法以GAPDH基因含量為內參，檢測肝組織中有關藥物代謝酶的基因表達。用Western Blot方法以Lam

4、inβ為細胞核蛋白的內參，GAPDH為細胞總蛋白內參，檢測有關蛋白的表達。
　　結果：⑴芘暴露能夠使野生型小鼠肝細胞核中的CAR蛋白含量顯著上升，并且上調其靶基因CYP2B10的mRNA表達，但是不能使CAR基因敲除小鼠產生相應的變化。⑵在兩種劑量的芘暴露下，野生型小鼠的相對肝重相對比較對照組相比有統(tǒng)計學意義的升高，而CAR基因敲除小鼠沒有升高。⑶在兩種劑量的芘暴露下，野生型小鼠血清中的ALT水平較其對照組相比有統(tǒng)計學意義的上升，

5、而CAR基因敲除小鼠沒有出現(xiàn)相應的毒性癥狀。⑷高劑量的芘暴露下（300 mg/kg/day），野生型小鼠肝組織切片較對照組相比，出現(xiàn)肝細胞腫脹，細胞質紅染，細胞核固縮等病理變化；而CAR基因敲除小鼠較對照組相比，沒有出現(xiàn)相應變化。⑸芘暴露下的野生型小鼠，肝組織中的藥物代謝酶CYP2B10、CYP3A11、GSTm1、GSTm3和 SULT1A1的mRNA表達較對照組相比都有顯著意義的上升（P＜0.05），但是相同處理下的CAR基因敲除小

6、鼠相應酶的mRNA表達較對照組相比沒有發(fā)生具有統(tǒng)計學意義的變化。芘暴露下的野生型小鼠和CAR基因敲除小鼠肝臟中CYP1A1和CYP1A2的mRNA表達較對照組相比都有顯著意義的上升（P＜0.05）。但是芘暴露下的野生小鼠較其對照組相比，肝臟中UGT1A6的mRNA表達水平下降，且具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），而CAR基因敲除小鼠此基因的表達水平較對照組相比沒有發(fā)生變化。⑹高劑量芘暴露下（300 mg/kg/day）的野生型小鼠，肝組織