血栓閉塞性脈管炎患者Th17細胞的檢測及意義.pdf

1、血栓閉塞性脈管炎(thromboangitis obliterans，TAO)，又稱Buerger's病，是一種累及血管的炎癥性、節(jié)段性和周期發(fā)作的慢性閉塞性疾病;流行病學(xué)顯示TAO呈世界范圍分布，尤其好發(fā)于東南亞、中東和遠東地區(qū)以及中歐，其中在中歐的猶太人發(fā)病率高達80％，印度為45％-63％[1]，在社會地位低、心理壓力大的嗜煙男性中尤其明顯[2]，在我國TAO好發(fā)于20～40歲之間的吸煙青壯年，且男女患病比例為29∶1;TAO屬于

2、慢性進展性的疾病，患者不會有立即死亡的危險，但他們的期望壽命會比正常人縮短，并且會帶來截肢致殘的風(fēng)險，值得重視的是血栓閉塞性脈管炎的截肢率據(jù)報道約為4％。TAO確切病因尚未明確，目前研究已經(jīng)證實主動或被動吸煙是參與本病發(fā)生和發(fā)展的重要環(huán)節(jié)，其他有關(guān)因素還包括自身免疫功能紊亂、基因多態(tài)性、性激素和前列腺素失調(diào)、遺傳、寒冷及潮濕的生活緩解、慢性損傷及感染等;TAO主要臨床表現(xiàn)為患肢缺血、疼痛、間歇性跛行、病變累及動脈搏動減弱或消失和游走性表

3、淺靜脈炎，病變嚴(yán)重者可出現(xiàn)肢體壞疽、繼發(fā)感染，導(dǎo)致截肢致殘等嚴(yán)重后果;目前針對TAO的治療方法主要包括戒煙、應(yīng)用血管擴張劑、改善微循環(huán)、抗生素、糖皮質(zhì)激素、中醫(yī)中藥等藥物制劑、以及外科手術(shù)或介入手術(shù)等。
　　由于目前TAO其發(fā)病原因及發(fā)病機制尚未明確，使本病成為難治性疾病之一;隨著研究的不斷深入，越來越多學(xué)者更傾向于認為TAO的發(fā)病是由于免疫復(fù)合物形成并沉積于患者的血管導(dǎo)致血管炎癥反應(yīng)和血栓形成所致，免疫功能紊亂在TAO發(fā)病過程中

4、具有重要意義。免疫功能紊亂導(dǎo)致機體炎癥反應(yīng)的產(chǎn)生貫穿TAO疾病的全病程;而人體自身淋巴細胞亞群對機體免疫功能的調(diào)節(jié)和穩(wěn)定起著重要作用;研究顯示，T淋巴細胞亞群在各種臨床疾病如自身免疫性疾病、病毒感染、惡性腫瘤等都有異常改變，而不同的T淋巴細胞亞群在各種疾病的發(fā)生、發(fā)展過程中都產(chǎn)生著不同的影響。
　　輔助T細胞亞群17(Thelper cell17，Th17)是近年發(fā)現(xiàn)的一種新的CD4+T細胞亞群，其在分化、調(diào)控以及生物學(xué)作用等方面

5、都不同于傳統(tǒng)的Th1細胞和Th2細胞，Th17主要分泌白細胞介素-17(IL-17)等細胞因子，而IL-17具有很強的促炎作用[3]，它對血管再生、招募炎性細胞以及調(diào)節(jié)內(nèi)皮細胞釋放炎性因子等起重要作用，能有效地介導(dǎo)炎癥反應(yīng)的發(fā)生。Th17細胞的分化過程、調(diào)控機制非常復(fù)雜;隨著目前不斷深入的研究，很多相關(guān)疾病均證實與Th17細胞及IL-17的高表達或過表達有關(guān):如近年來發(fā)現(xiàn)在多種自身免疫性疾病如自身免疫性腦脊髓膜炎(EAE)[4]、類風(fēng)濕

6、性關(guān)節(jié)炎[5]的進程及靶組織中都可以檢測到IL-17的表達;Th17細胞及其因子IL-17在炎癥性腸病(IBD)等疾病中也發(fā)揮著重要作用[6];而針對Th17在自身免疫性關(guān)節(jié)炎中介導(dǎo)T細胞激活和骨吸收的作用也有被Sato等發(fā)現(xiàn)[7];在對病毒性肝炎的研究中發(fā)現(xiàn)，患者肝組織和外周血中Th17細胞表達頻率及IL-17表達水平均明顯增加，提示Th17細胞及IL-17可能加重肝臟的炎癥反應(yīng)[8];在感染和其他炎癥性疾病中，Caruso等[9]也

7、提出了IL-23/IL-17軸與幽門螺桿菌相關(guān)胃炎的發(fā)病機制有關(guān);IL-21可以介導(dǎo)以IL-17高表達為特征等實驗性大腸炎[10];也有研究表明Th17細胞及其分泌的IL-17也與腫瘤的發(fā)生發(fā)展有著密切的關(guān)系[11];其他如克隆氏病[12]、銀屑病[13]等的病理機制也與Th17細胞及其分泌的細胞因子相關(guān);這些證據(jù)足以表明Th17細胞在介導(dǎo)炎癥及自身免疫性疾病中發(fā)揮著重要作用。但Th17細胞及其分泌的細胞因子IL-17與血栓閉塞性脈管炎

8、的發(fā)病及病程進展過程有無關(guān)聯(lián)性尚未見相關(guān)報道。
　　目的:
　　本課題就根據(jù)測定TAO患者外周血Th17細胞及IL-17等因子參數(shù)，通過患者組和健康對照組之間以及不同分期患者組之間的相互比較，探討TAO患者外周血Th17細胞百分率及IL-17表達水平的變化及臨床意義，分析可能的機理，為進一步探討Th17細胞及IL-17在TAO的發(fā)病及病程進展過程中所產(chǎn)生的作用，希望可以針對其發(fā)病機制提出相關(guān)的干預(yù)措施，控制或延緩病程的發(fā)展，

9、降低患者致傷致殘的風(fēng)險。
　　方法:
　　選取廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第三醫(yī)院血管外科36例臨床確診的血栓閉塞性脈管炎(TAO)患者（診斷標(biāo)準(zhǔn)嚴(yán)格遵照Olin在2000年提出的TAO診斷標(biāo)準(zhǔn)），均為男性吸煙患者，年齡25-53歲，平均年齡38歲，根據(jù)其病程的不同分期將患者細分為局部缺血期組12例、營養(yǎng)障礙期組14例、壞疽期組10例;再選取健康體檢者30例設(shè)相應(yīng)的對照組（男性體檢者，年齡35-42歲，平均年齡37歲，無煙酒嗜好，排除感

10、染、高血壓、冠心病、糖尿病、自身免疫性疾病的健康志愿者）。所有選取研究對象均清晨空腹取肘靜脈血6ml，其中3ml用于流式細胞儀檢測外周血Th17細胞的百分率;另外3ml靜脈血用ELISA雙抗體夾心法檢測血漿IL-17的表達水平。
　　結(jié)果:
　　1.通過流式細胞術(shù)檢測，Th17細胞百分率(IL-17A/CD4+T)TAO患者組為（5.52±2.328）％;健康對照組為(1.82±0.3935)％;TAO組與對照組外周血Th1

11、7細胞百分率相互比較P＜0.05，結(jié)果有統(tǒng)計學(xué)差異;TAO患者組中局部缺血期組（Ⅱ期）外周血Th17細胞百分率為（5.20±2.477）％;營養(yǎng)障礙期組（Ⅲ期）為(5.58±2.435)％;壞疽期組（Ⅳ期）為（5.82±2.185）％;三者之間相互比較P＞0.05，差別無統(tǒng)計學(xué)意義;
　　2.ELISA檢測血漿IL-17表達水平結(jié)果顯示，TAO患者組為(32.17±2.662);健康對照組為(5.96±0.675); TAO組與對

12、照組外周血IL-17表達水平相互比較P＜0.05，結(jié)果有統(tǒng)計學(xué)差異;TAO患者組中局部缺血期組（Ⅱ期）IL-17表達水平為(30.58±1.691);營養(yǎng)障礙期組（Ⅲ期）為(32.06±2.980);壞疽期組（Ⅳ期）為(34.24±1.756);局部缺血期組（Ⅱ期）與壞疽期組（Ⅳ期）結(jié)果相互比較P小于0.05，提示有統(tǒng)計學(xué)差異;而局部缺血期組（Ⅱ期）與營養(yǎng)障礙期組(Ⅲ期)、營養(yǎng)障礙期組（Ⅲ期）與壞疽期組（Ⅳ期）結(jié)果相互比較P大于0.05

13、，提示無統(tǒng)計學(xué)差異。
　　結(jié)論:
　　1.TAO患者外周血Th17細胞表達頻率及活性明顯增高，IL-17表達水平也增高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，提示Th17細胞激活及IL-17因子的促炎作用可能與血栓閉塞性脈管炎的發(fā)病及病程進展密切相關(guān);因而可以針對Th17細胞及其分泌因子IL-17的作用機制，在TAO患者病程中應(yīng)用抑制Th17細胞激活及分化發(fā)育，或調(diào)節(jié)、抑制IL-17細胞因子促炎作用的干預(yù)措施，可能會對TAO的病程產(chǎn)生重要影響

14、，為TAO的臨床診療提供新的思路。
　　2.局部缺血期組（Ⅱ期）與壞疽期組（Ⅳ期）IL-17表達水平相互比較P值小于0.05，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，考慮IL-17表達水平的高低在評價Ⅳ期TAO患者難治性潰瘍或壞疽等炎癥反應(yīng)的嚴(yán)重程度中可能具有重要作用;
　　3.TAO患者不同分期組之間Th17細胞檢測結(jié)果相互比較雖然均無統(tǒng)計學(xué)差異，但Th17細胞百分率可見逐步升高的趨勢;同樣IL-17表達水平局部缺血期組（Ⅱ期）與營養(yǎng)障礙期組（