HEC-G-PEG的合成及其用于毛細(xì)管電泳分離蛋白質(zhì)的研究.pdf

1、毛細(xì)管電泳（capillaryelectrophoresis，CE）是指帶電粒子在內(nèi)徑為20～200μm的毛細(xì)管中，在高壓直流電場驅(qū)動力作用下的定向運(yùn)動行為。CE技術(shù)常被用于生物分子的分離分析。與傳統(tǒng)的分離分析技術(shù)相比，CE技術(shù)具有很多特殊的優(yōu)點(diǎn):(1)分離速度快，只需數(shù)分鐘即可完成樣品的分離;(2)分離效率高，對蛋白質(zhì)的分離可以高達(dá)上百萬的理論塔板數(shù);(3)樣品消耗少，通常只需數(shù)納升的樣品;(4)自動化程度高，整個分離及檢測過程均由毛

2、細(xì)管電泳儀自動完成;(5)分析對象廣泛，除了常見的對多肽、蛋白質(zhì)、核酸和脂類等的分離外，CE技術(shù)還被用于小的帶電粒子的分離分析，如有機(jī)或無機(jī)的陰離子和陽離子等，以及整體的生物分子的分離分析，如病毒、細(xì)菌和細(xì)胞等。在CE分離蛋白質(zhì)的過程中，蛋白質(zhì)尤其是堿性蛋白質(zhì)在通常pH值范圍內(nèi)會帶正電荷，而毛細(xì)管內(nèi)壁Si-OH因解離為Si-O-離子而帶負(fù)電荷，靜電相互作用導(dǎo)致了蛋白質(zhì)的強(qiáng)烈吸附，進(jìn)而產(chǎn)生分離效率下降、峰對稱性差、遷移時間重現(xiàn)性差等問題。

3、解決蛋白吸附最常見的方法是在毛細(xì)管內(nèi)壁涂覆涂層來抑制Si-OH的解離，進(jìn)而抑制蛋白質(zhì)的吸附，提高蛋白質(zhì)分離效率和分離重現(xiàn)性。
　　 本論文通過醚化反應(yīng)方法合成了羥乙基纖維素接枝聚乙二醇(HEC-g-PEG)，并將其作為毛細(xì)管物理涂層分離蛋白質(zhì)混合物，取得了較好的結(jié)果，主要研究工作如下:
　　 1.首先通過兩步反應(yīng)將端基為羥基的聚乙二醇轉(zhuǎn)化為碘功能化的聚乙二醇，再通過碘功能化的聚乙二醇和羥乙基纖維素表面羥基的醚化反應(yīng)，合成

4、了羥乙基纖維素(HEC)與不同分子量聚乙二醇(PEG)形成的接枝共聚物(HEC-g-PEG)，并用核磁共振(NMR)、熱重分析(TGA)和示差掃描量熱法(DSC)對接枝前后的聚合物進(jìn)行了表征，同時利用稱重法、核磁計算和碘離子濃度滴定方法對接枝聚合物的接枝率進(jìn)行了表征。
　　 2.將HEC-g-PEG聚合物用作毛細(xì)管物理涂層分離四種標(biāo)準(zhǔn)堿性蛋白質(zhì)。研究了PEG分子量、緩沖溶液pH值、緩沖溶液離子強(qiáng)度、蛋白質(zhì)濃度以及蛋白質(zhì)注入時間等