銅陵藥用牡丹根腐病菌生物學(xué)特性及遺傳研究.pdf

1、本論文首先對(duì)安徽銅陵地區(qū)牡丹根腐病原菌進(jìn)行了分離與鑒定，并從生物學(xué)特性、生物學(xué)性狀的遺傳穩(wěn)定性、營(yíng)養(yǎng)體親和性、同工酶電泳分析及有效殺菌劑篩選等方面對(duì)牡丹根腐病原菌進(jìn)行了較為系統(tǒng)的研究，主要結(jié)果如下： 1.牡丹根腐病原菌的鑒定 從銅陵地區(qū)發(fā)病的牡丹上分離到12株根腐病原菌，通過對(duì)其形態(tài)特征與培養(yǎng)性狀觀察，并結(jié)合其生物學(xué)特性研究，根據(jù)C．Booth、Nelson的鐮刀菌分類系統(tǒng)，將該菌確定為茄病鐮刀菌[Fusarium so

2、lani(Mart.)Sacc．]。 2.牡丹根腐病菌生物學(xué)特性的研究 對(duì)牡丹根腐病菌(Fusarium solani)的研究結(jié)果表明，該菌多數(shù)對(duì)單糖、雙糖、多糖等碳源及有機(jī)氮和無機(jī)氮均能夠利用。其中葡萄糖、麥芽糖、甘油為適宜碳源，產(chǎn)孢量以果糖最高。以有機(jī)脲為氮源培養(yǎng)基上產(chǎn)孢量最高。蛋白胨為最適宜的氮源培養(yǎng)基，病原菌在其上生長(zhǎng)速率最大。全黑暗條件下氣生菌絲較多，產(chǎn)孢量也最高。PSA、淀粉、PDA和茄汁是適合病原菌菌絲生長(zhǎng)

3、的培養(yǎng)基。該菌在10-35℃條件下均能生長(zhǎng)，最適生長(zhǎng)溫度為25-30℃，溫度低于5℃或高于40℃菌絲不能生長(zhǎng)，在25-35℃之間孢子萌發(fā)率達(dá)到最大；孢子致死溫度為55℃。病原菌在pH4.1-11.5之間均能生長(zhǎng)，其中在pH5.5-7.0之間病原菌絲生長(zhǎng)最好；pH在7.0時(shí)分生孢子的萌發(fā)率最高。 3.生物學(xué)性狀遺傳穩(wěn)定性 試驗(yàn)結(jié)果表明，牡丹根腐病菌(F. solani)的菌落形態(tài)和和菌絲生長(zhǎng)速率在無性單孢后代可以穩(wěn)定遺傳，

4、單孢后代之間差異不顯著。菌株MD-1-5和GH-1-1的各代單分生孢子株在菌落形態(tài)上與其對(duì)應(yīng)親本之間基本相同，其菌落近圓形，邊緣規(guī)則整齊，質(zhì)地均勻，氣生菌絲較少。菌株MD-1.5和GH-1-1的各代單孢株在生長(zhǎng)速率上較為相似。菌株F-3各無性單孢株后代的菌落形態(tài)和生長(zhǎng)速率與親本是相似的，F(xiàn)-3各單孢株間與親本在生長(zhǎng)速率上均無顯著差異。 4.營(yíng)養(yǎng)親和性測(cè)定 利用氯酸鹽培養(yǎng)基對(duì)分離得到12個(gè)牡丹根腐病菌(F．solani)進(jìn)

5、行誘變，共獲得99個(gè)nit突變體，利用不同氮源培養(yǎng)基對(duì)突變體進(jìn)行鑒定，得到nitl型64株，nit3型19株，nitM型16株。來源于同一野生菌株的不同類型nit突變體間可產(chǎn)生互補(bǔ)反應(yīng)而形成異核體，其中以nitM型突變株互補(bǔ)性最好，將各菌株的nit突變株和測(cè)試菌株的nitM配對(duì)，結(jié)果12個(gè)菌株歸為3個(gè)不同的營(yíng)養(yǎng)體親和群(VCGs)。將誘變獲得的99個(gè)nit突變株分別在PDA斜面上轉(zhuǎn)管培養(yǎng)4次(80 d)后，除4株恢復(fù)成野生菌株外，其余多

6、數(shù)nit突變菌株表現(xiàn)穩(wěn)定。 5.酯酶同工酶及可溶性蛋白電泳分析 采用同工酶電泳技術(shù)，對(duì)采自安徽銅陵的12株牡丹根腐病菌(Fusarium solani)菌株進(jìn)行了酯酶同工酶和可溶性蛋白分析。結(jié)果表明，供試的12個(gè)牡丹根腐病菌菌株的酯酶同工酶在R偽0.78處各有1條酶帶，但各個(gè)菌株酶帶的深淺、濃淡均有差異，根據(jù)酶帶的強(qiáng)弱可以將其分為3種類型。12個(gè)菌株的可溶性蛋白圖譜存在較大的差異，根據(jù)各菌株的主譜帶數(shù)可將其分為4種類型：

7、A型具有8條主譜帶，共2個(gè)菌株，占供試菌株的16.7％；B型具有7條主譜帶，共8個(gè)菌株，占供試菌株的66.7％；C型和D型分別具有6條和5條主譜帶，各有1個(gè)菌株，均占供試菌株的8.3％。從譜帶遷移的位置可以看出，12個(gè)供試菌株的可溶性蛋白圖譜主要分布在3個(gè)區(qū)域內(nèi)：區(qū)域Ⅰ Rf為0.24～0.36；區(qū)域Ⅱ Rf為0.42～0.67；區(qū)域ⅢRf為0.70～0.79。在Rf為0.24，Rf為0.36，Rf為0.42處的3條譜帶為安徽丹皮根腐病

8、菌的特征性譜帶。酯酶同工酶和可溶性蛋白電泳均表明各供試菌株在遺傳上具有相似性且種內(nèi)變異程度較小。 6.牡丹根腐病菌有效殺菌劑篩選 分別以菌絲生長(zhǎng)速率法和孢子萌發(fā)法測(cè)定了6種殺菌劑對(duì)牡丹根腐病菌的毒力。菌絲生長(zhǎng)速率法測(cè)定毒力的結(jié)果表明，6種殺菌劑對(duì)牡丹根腐病菌的EC<,50>值大小順序?yàn)椋亨拙?百菌清>惡醚唑>代森錳鋅>多菌靈>咪鮮胺；咪鮮胺對(duì)牡丹根腐病原菌具有十分顯著的抑制效果。孢子萌發(fā)法測(cè)定毒力的結(jié)果表明，百菌清對(duì)牡