大鼠尸體軟組織生物力學(xué)及肝臟量化病理學(xué)時(shí)序性變化的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、背景與目的：
　　早在三百多年前被譽(yù)為歐洲法醫(yī)學(xué)之父的意大利醫(yī)生Paul明確指出:死亡時(shí)間(Postmortem interval,PMI)的推斷是法醫(yī)學(xué)鑒定首先要解決的問題。準(zhǔn)確的死亡時(shí)間的推斷在很大程度上為偵察工作提供線索、劃定偵察范圍、確定嫌疑人有無作案時(shí)間、或者確定案件性質(zhì)、闡明作案過程均有價(jià)值[1]。近幾十年來,國(guó)內(nèi)外法醫(yī)工作者在死亡時(shí)間的推斷方面使用生物學(xué)、化學(xué)、物理學(xué)、生物化學(xué)、生物物理學(xué)、免疫組織化學(xué),分子生物學(xué)等

2、方法取得可喜成果。但鑒于死后尸體受到多種因素的影響,包括自身因素和環(huán)境因素等,尤其是自溶和腐敗的影響,迄今,還沒有找到一種方法對(duì)準(zhǔn)確推斷PMI具有相同程度的敏感性[2]。因此,準(zhǔn)確的PMI推斷尚需綜合多種手段和方法進(jìn)行評(píng)估。對(duì)于死后早期時(shí)間的推斷,目前的推斷方法較多;而死后較長(zhǎng)時(shí)間尤其是腐敗尸體死亡時(shí)間的評(píng)估方法則相對(duì)較少,推斷的誤差也相對(duì)較大,且至今尚缺乏精確而簡(jiǎn)便的方法,因此死亡時(shí)間的評(píng)估尤其是死后較長(zhǎng)時(shí)間的評(píng)估至今還是法醫(yī)學(xué)的難題

3、之一。
　　為此,本實(shí)驗(yàn)將生物力學(xué)理論和技術(shù)應(yīng)用于PMI的推斷,探討了尸體軟組織的生物力學(xué)性狀的時(shí)序性變化與PMI的關(guān)系,進(jìn)而將法醫(yī)生物力學(xué)應(yīng)用到PMI的推斷,使法醫(yī)生物力學(xué)(forensic biomechanism)的應(yīng)用進(jìn)一步得到擴(kuò)展和延伸。同時(shí),本實(shí)驗(yàn)運(yùn)用計(jì)算機(jī)圖像數(shù)字分析(Computer digital image analysis)技術(shù),對(duì)肝細(xì)胞HE染色下進(jìn)行病理學(xué)圖像的體視學(xué)分析與量化處理,并將其應(yīng)用于法醫(yī)病理學(xué)P

4、MI的推斷,為病理學(xué)的發(fā)展趨勢(shì)——量化病理學(xué)在法醫(yī)學(xué)的應(yīng)用提供了新的思路,并進(jìn)一步結(jié)合尸體主要臟器的常規(guī)形態(tài)學(xué)觀察,探討其與PMI的關(guān)系。
　　材料與方法：
　　清潔級(jí)健康雄性SD大鼠80只,3~3.5月齡,體重250~300g,用頸脫位法處死后,立即置于恒溫箱內(nèi),分0、6、12、18、24、30、36、42、48、60、72、96、120、144、168、192h時(shí)間組,提取胸部皮膚、腹壁肌肉、胸主動(dòng)脈、大腸和小腸進(jìn)行生物

5、力學(xué)指標(biāo)檢測(cè),每組5只,檢測(cè)極限載荷、應(yīng)力、應(yīng)變等軟組織生物力學(xué)指標(biāo)。同時(shí),提取全腦、最大葉肝臟、全心、左肺最大葉、左腎進(jìn)行 HE切片染色和鏡下觀察,觀察組織細(xì)胞的自溶和腐敗的形態(tài)學(xué)變化;并對(duì)肝細(xì)胞進(jìn)行體視學(xué)觀察和量化處理,檢測(cè)肝細(xì)胞的核面積、核漿比、核漿光密度比和核異形指數(shù),探討其與PMI的關(guān)系。
　　結(jié)果：
　　1、大體及鏡下改變
　　大體改變:死后尸體主要經(jīng)歷了尸僵、尸綠、毛發(fā)脫落、腹部膨脹至“巨人觀”,軟化塌陷

6、的過程,腹腔內(nèi)臟器逐步液化。
　　鏡下改變:腦、心、肺、肝、腎等實(shí)質(zhì)器官組織形態(tài)隨PMI呈一定規(guī)律性變化,腦自溶相對(duì)較快,48h即難以取出,心臟自溶速率較慢,96h仍可見心肌纖維。各組織細(xì)胞均經(jīng)歷嗜堿性逐漸減弱、嗜酸性逐漸增強(qiáng)的過程,細(xì)胞核染色質(zhì)由逐漸聚集到最后突破核膜溶解。
　　2、軟組織生物力學(xué)性狀
　　皮膚具有最大的極限載荷,平均為11.67N;小腸的極限載荷最小,平均僅為1.37N。皮膚、小腸死后18h內(nèi)均呈較

7、明顯下降趨勢(shì)(YPMI=31.03-1.26XML,r=-0.985和YPMI=49.6-25.1XML,r=-0.956)。皮膚18~36h轉(zhuǎn)呈上升趨勢(shì),36h后又呈緩慢下降趨勢(shì),但相鄰各點(diǎn)差別無統(tǒng)計(jì)意義。小腸18h后無明顯變化趨勢(shì)。肌肉與大腸的規(guī)律較為相似,24h內(nèi)均呈較明顯下降趨勢(shì),相鄰各點(diǎn)差別均有統(tǒng)計(jì)意義(YPMI=42.6-5.18XML+,r=-0.992和YPMI=58.1-7.83XML,r=-0.988)。之后,變化趨

8、勢(shì)不明顯,稱之為“平臺(tái)期”。其中,肌肉24~96h呈平臺(tái)期,之后緩慢下降,但96~168h相鄰各點(diǎn)差別具統(tǒng)計(jì)意義(YPMI=173.9-23.8XML,r=-0.97);大腸24~72h呈平臺(tái)期,之后緩慢下降(YPMI=231.7-44.1XML, r=-0.981)。血管死后變化趨勢(shì)不明顯。
　　血管的應(yīng)變最大,平均為4.12,但變化趨勢(shì)無明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。其他組織24h內(nèi)均呈明顯下降趨勢(shì),下降速率較快,直線方程分別為皮膚:YP

9、MI=55.1-45.6X應(yīng)變,r=-0.974;肌肉:YPMI=45.5-36.8X應(yīng)變,r=-0.993,大腸:YPMI=59.29-55.1X應(yīng)變,r=-0.991小腸:YPMI=56.7-90.6X應(yīng)變,r=-0.997。24h后肌肉與小腸變化趨勢(shì)不明顯;皮膚24~72h呈平臺(tái)期,72h后呈現(xiàn)緩慢下降趨勢(shì),72~96h無統(tǒng)計(jì)意義,96小時(shí)后下降趨勢(shì)具有統(tǒng)計(jì)意義;大腸與皮膚較為相似,24~72h呈現(xiàn)平臺(tái)期,72~192h呈下降趨勢(shì)

10、(YPMI=297.7-333X應(yīng)變, r=-0.991),120h后各時(shí)間點(diǎn)的差別具有統(tǒng)計(jì)意義。
　　各組織的最大應(yīng)力變化趨勢(shì)與極限載荷趨勢(shì)較為一致,血管仍無明顯規(guī)律,其他組織在24h內(nèi)下降趨勢(shì)較明顯。24h后,除小腸未見明顯趨勢(shì)外,均有下降趨勢(shì),但較24h內(nèi)緩慢。
　　3、肝細(xì)胞病理圖像分析的量化指標(biāo)
　　肝細(xì)胞核面積變化不穩(wěn)定,隨PMI的變化趨勢(shì)不明顯。核漿比總體呈逐漸下降趨勢(shì),其中,0h~36h差別顯著(P<0

11、.05)。36h~60h呈緩慢上升趨勢(shì),但二者差別無統(tǒng)計(jì)意義(P>0.05)。60h~72h下降明顯,有統(tǒng)計(jì)意義(P<0.05)。核漿光密度比總體呈先上升后下降趨勢(shì),36h內(nèi)呈逐漸上升趨勢(shì),36h達(dá)峰值,相鄰點(diǎn)間差別具有統(tǒng)計(jì)意義(P<0.05);24h與36h差別明顯(P<0.01)。36h~72h呈逐漸下降趨勢(shì),相鄰點(diǎn)時(shí)間點(diǎn)差別均有統(tǒng)計(jì)意義。異形指數(shù)72小時(shí)內(nèi)呈逐漸上升趨勢(shì)(YPMI=-699.5-512.1XID,r=0.982)。

12、
　　結(jié)論：
　　1、尸體各器官組織形態(tài)學(xué)時(shí)序性變化與 PMI之間存在明顯的相關(guān)性。與水中尸體比較,其自溶和腐敗發(fā)生的早約12小時(shí)。因此,根據(jù)在死后各時(shí)段的器管組織細(xì)胞的時(shí)序性形態(tài)變化特點(diǎn),可大約估算 PMI,同時(shí),提示日常法醫(yī)病理學(xué)檢驗(yàn)時(shí)應(yīng)注意鑒別生前彌漫性病變與死后自溶腐敗性變化,應(yīng)爭(zhēng)取盡早在死后24小時(shí)內(nèi)尸檢或冷凍保存尸體。
　　2、尸體皮膚、肌肉、大腸、小腸軟組織的極限載荷、應(yīng)力、應(yīng)變隨 PMI的延長(zhǎng)呈逐漸下降

13、的時(shí)序性趨勢(shì),在死后不同時(shí)間段的下降速率明顯不同,存在各自的推斷PMI的“窗口期”和互補(bǔ)性,綜合各組織的各項(xiàng)指標(biāo)亦能提高 PMI推斷的準(zhǔn)確性。提示軟組織生物力學(xué)指標(biāo)及其檢測(cè)方法可以作為推斷PMI的一種較客觀、簡(jiǎn)便的技術(shù)手段。
　　3、病理學(xué)圖像量化分析技術(shù)應(yīng)用于PMI推斷,證實(shí)了常規(guī)HE染色的肝細(xì)胞的核漿比、核漿光密度比、異形指數(shù)均較好地反映肝細(xì)胞的自溶腐敗程度,其中,核漿光密度比呈現(xiàn)先上升后下降趨勢(shì),核漿比和異形指數(shù)呈線性下降趨