有氧運動對高脂膳食誘導的肥胖大鼠睪丸CRP與MCP-1表達以及生精細胞凋亡的影響.pdf

1、實驗目的:
　　探討高脂膳食誘導的肥胖大鼠睪丸組織生精細胞凋亡與炎癥因子CRP、MCP-1的關系，并研究有氧運動對雄性高脂膳食大鼠生精細胞凋亡與炎癥反應的干預作用。
　　實驗方法:
　　將雄性健康SD大鼠隨機分為4組:普通膳食對照組(C)、高脂膳食組(HF)、普通膳食+運動組(CE)、高脂膳食+運動組(HE)，每組各12只，共48只;C組和CE組大鼠，普通飼料喂養(yǎng);HF組和HE組大鼠，高脂、高熱量飼料喂養(yǎng)。實驗結束后，

2、各組大鼠數量為:C組8只，HF組11只，CE組10只，HE組11只。CE組及HE組大鼠進行10周60min無負重游泳運動，每周6天。實驗結束后檢測各組大鼠血清中總膽固醇(TC)、甘油三脂(TG)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL);測量大鼠體重、體長及睪周脂肪、腎周脂肪重量，計算Lee's指數及脂體比;酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)及蛋白印記法(Western Blot)測定C反應蛋白(CRP)、單核細胞趨化蛋白1(MCP-1

3、)水平;免疫組化法檢測睪丸組織中CRP、MCP-1表達位置;RT-PCR測定大鼠睪丸及睪周脂中CRP、MCP-1的表達量;原位缺口末端標記法(TUNEL)檢測大鼠睪丸組織細胞凋亡情況;HE染色觀察睪丸組織形態(tài)學的變化。
　　實驗結果:
　　1.實驗10周后，與C組相比，CE組大鼠體重呈極顯著降低，Lee's指數、TG顯著降低，HDL極顯著升高，睪周脂、脂體比、TC、LDL無顯著性差異。HF組與C組相比，體重、睪周脂、脂體比、

4、Lee's指數、LDL、TC均呈極顯著升高，TG、HDL均無明顯差異。與HF組相比，HE組大鼠體重、睪周脂、Lee's、脂體比、LDL均極顯著降低，TC、TG呈顯著降低，HDL無顯著性差異。
　　2.HE染色結果:C組大鼠生精小管內各級生精細胞發(fā)育正常，排列緊密，細胞結構清晰，管腔內可見大量成熟精子，同時可以明顯地看到生精小管之間的睪丸間質細胞;HF組生精小管管壁變薄，各級生精細胞排列混亂，細胞層數和成熟精子數量明顯減少，可見細胞

5、脫落現(xiàn)象，生精小管基膜不完整，間質細胞明顯減少;CE組大鼠生精小管基本正常，各級生精細胞排列基本有序，細胞間隙增大;HE組各級生精細胞發(fā)育基本正常，偶見細胞脫落現(xiàn)象，生精小管間間質組織疏松分布。
　　3.與C組相比，HF組大鼠血清中CRP水平極顯著升高，MCP-1水平顯著升高，CE組大鼠血清CRP、MCP-1無明顯差異。HE組與HF組相比，CRP、MCP-1水平均呈顯著降低。分析可知，高脂膳食可引起大鼠血清中CRP與MCP-1水平

6、增加，而有氧運動能夠降低血清CRP及MCP-1水平。
　　4.與C組相比，HF組睪周脂中CRPmRNA水平極顯著升高，MCP-1 mRNA水平顯著升高，CE組大鼠睪周脂中CRP、MCP-1mRNA水平有所上升，但無顯著性差異。HE組與HF組相比，CRPmRNA水平極顯著降低，MCP-1 mRNA水平顯著降低。由此可知，高脂膳食使大鼠睪周脂中CRP、MCP-1mRNA水平升高，引起睪周脂炎癥反應，而有氧運動可適當降低CRP、MCP-

7、1 mRNA水平，減輕炎癥狀態(tài)。
　　5.與C組相比，HF組睪丸組織CRP、MCP-1 mRNA水平極顯著升高，CE組大鼠睪丸組織CRP、MCP-1 mRNA無顯著性差異。HE組與HF組相比，CRP、MCP-1 mRNA水平極顯著降低。高脂膳食使大鼠睪丸組織中CRP、MCP-1 mRNA水平升高，引起睪丸炎癥反應，而有氧運動能夠降低CRP、MCP-1 mRNA水平，減緩炎癥反應。
　　6.蛋白印記法測定蛋白表達結果:HF組與

8、C組相比，CRP、MCP-1蛋白表達水平極顯著升高;CE組與C組相比，CRP、MCP-1蛋白表達水平無顯著性差異。HE組與HF組相比，CRP、MCP-1蛋白表達水平顯著降低，高脂膳食引發(fā)的睪丸炎性狀態(tài)，通過運動能夠改善。
　　7.免疫組化結果:在C組大鼠睪丸組織中未見CRP、MCP-1有表達;高脂膳食HF組，發(fā)現(xiàn)CRP在睪丸間質細胞有表達，而MCP-1在睪丸間質細胞和支持細胞都有部分表達;CE組及HE組大鼠睪丸組織中較低水平的CR

9、P表達，HE組也可見少量MCP-1的表達，而CE組未發(fā)現(xiàn)有MCP-1表達。大鼠有氧運動后可降低CRP、MCP-1的表達水平。
　　8.大鼠睪丸組織中凋亡細胞情況:與C組相比，CE組睪丸組織中生精細胞凋亡率有所升高，但無明顯差異，HF組和HE組睪丸組織中生殖細胞凋亡率極顯著升高。HE組與HF組相比，睪丸組織中生殖細胞凋亡率極顯著降低。通過單因素方差分析可知，高脂膳食可能引起睪丸組織的炎癥反應，從而導致睪丸組織中生殖細胞凋亡增加，而有

10、氧運動可以緩解這一情況。
　　結論:
　　1.高脂膳食能夠引發(fā)SD雄性大鼠脂代謝紊亂，通過氧運動能改善這一情況。
　　2.高脂膳食喂養(yǎng)可使SD雄性大鼠睪丸組織結構發(fā)生變化，并且使得生精細胞凋亡明顯增多，而有氧運動能使這一情況得到改善。
　　3.高脂膳食喂養(yǎng)的大鼠生精細胞凋亡和CRP、MCP-1表達具有相關性，而有氧運動的大鼠其CRP、MCP-1的表達及精子凋亡率也有所降低，提示機體可能在高脂膳食誘導炎癥時引發(fā)睪丸