人類新型冠狀病毒NL63木瓜樣蛋白酶生物學(xué)功能研究.pdf

1、本研究以人類新型冠狀病毒NL63(human coronavirus NL63，HCoV-NL63)木瓜樣蛋白酶(papain-like protease，PLP)為研究對(duì)象，首先構(gòu)建了木瓜樣蛋白酶1(papain-likeprotease 1，PLP1)的突變體D1225A和木瓜樣蛋白酶2(papain-like protease 2，PLP2)的突變體D1849A表達(dá)載體。通過Western Blotting技術(shù)證實(shí)，PLP1及其突

2、變體C1062A、H1212A、D1225A對(duì)泛素(ubiquitin，Ub)分子不具有去泛素化(deubiquitinase，DUB)活性，PLP2卻明顯不同，野生型PLP2及突變體D1849A具有較強(qiáng)的DUB活性，而突變體C1678A、H1836A則喪失了此活性，同時(shí)對(duì)泛素樣分子——干擾素刺激基因15(interferon stimulate gene 15，ISG15)進(jìn)行檢測(cè)，得到了相同的結(jié)論，提示PLP2的第1678位半胱氨酸

3、和第1836位組氨酸是其DUB活性所必需的位點(diǎn)，第1849位天冬氨酸屬于非必需位點(diǎn)。
　　 HCoV-NL63 PLP對(duì)宿主抗病毒天然免疫反應(yīng)調(diào)控機(jī)制研究證實(shí)，PLP1及突變體C1062A、H1212A、D1225A均不能抑制干擾素-β(interferon-β，IFN-β)表達(dá)；PLP2和突變體D1849A卻能強(qiáng)烈抑制IFN-β表達(dá)，但突變體C1678A、H1836卻喪失了此功能。這表明，PLP2的干擾素拮抗活性與PLP2的D