去骨瓣減壓術(shù)對(duì)CD1小鼠創(chuàng)傷性腦損傷后行為學(xué)改變及繼發(fā)性損傷的影響.pdf

1、目的:
　　創(chuàng)傷性腦損傷(Trauma Brain Injury, TBI)屬于神經(jīng)外科常見(jiàn)病，以高致殘率、高死亡率為特征，耗費(fèi)了極高的社會(huì)成本。根據(jù)物理?yè)p傷的性質(zhì)、組織病理類(lèi)型、意識(shí)及神經(jīng)功能的損傷程度，可以將創(chuàng)傷性腦損傷進(jìn)行諸多分類(lèi)。雖然專(zhuān)家們已經(jīng)制定了治療指南用以改善預(yù)后，但想要在發(fā)病早期進(jìn)一步提高治療效果，仍需要進(jìn)行大量的工作。去骨瓣減壓術(shù)(Decompressive Craniotomy，DC)指去除部分顱骨，剪開(kāi)硬腦膜

2、，以緩解顱內(nèi)高壓，降低腦水腫造成的損害。一旦顱內(nèi)壓恢復(fù)至正常水平，患者病情相對(duì)平穩(wěn)（通常是去除骨瓣1月～3月后），行顱骨修補(bǔ)術(shù)。嚴(yán)重腦血管病引起的腦腫脹行去骨瓣減壓術(shù)的治療效果已經(jīng)有完善的研究得以證實(shí)，但去骨瓣減壓術(shù)對(duì)于創(chuàng)傷性腦損傷的影響仍存在爭(zhēng)議。本研究應(yīng)用自由落體打擊模型建立CD1小鼠TBI模型，應(yīng)用干濕重法檢測(cè)腦水腫的程度，采用神經(jīng)行為學(xué)人工評(píng)分及一系列神經(jīng)行為學(xué)試驗(yàn)觀察TBI及DC后的行為學(xué)變化，并試圖闡明其分子機(jī)制，為臨床上治

3、療創(chuàng)傷性腦損傷及顱骨修補(bǔ)最佳時(shí)機(jī)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:
　　采用清潔級(jí)CD1小鼠75只，成年雄性，體重40g±5g，隨機(jī)分為正常對(duì)照組，TBI組，TBI+DC組;采用自由落體打擊模型致小鼠創(chuàng)傷性腦損傷(TBI);正常對(duì)照組15只，不作任何干預(yù)，正常飼養(yǎng);TBI組30只，給予自由落體打擊造模:小鼠頭部皮膚剪開(kāi)，暴露左側(cè)頂骨，將頭部固定于金屬硬質(zhì)板上，左側(cè)項(xiàng)骨置與金屬板平行，圓柱形重物重10g，高度25cm，自直徑稍大于自身

4、的有機(jī)玻璃管中自由落下打擊已暴露的顱骨部分，避免回彈傷，操作完成后規(guī)范縫合頭皮。TBI+DC組30只，先給予自由落體打擊造模，過(guò)程同上，4～6小時(shí)后行去骨瓣減壓術(shù)，顯微鏡下用微型電鉆磨除打擊部位的顱骨;每組各取固定5只于處理完成后1小時(shí)、24小時(shí)、7天、14天、21天、28天行神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分(Neurological SeverityScores，NSS);除正常對(duì)照組外，各組干預(yù)前3天及干預(yù)后7天、14天、21天、28天行曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn);1

5、4天、28天時(shí)行高架十字迷宮實(shí)驗(yàn);28天時(shí)行巴恩斯迷宮實(shí)驗(yàn)。除正常對(duì)照組外，其余每組每個(gè)時(shí)間點(diǎn)另取3只，分別于處理完成后12小時(shí)、1天、3天、5天、7天用干濕重法測(cè)定腦組織水分含量，放入65℃烤箱48小時(shí)后稱(chēng)干重。用免疫組織化學(xué)方法觀察膠質(zhì)纖維酸性蛋白(Glial fibrillary acidic protein，GFAP)和神經(jīng)元特異性核蛋白(neuron-specific nuclear protein，Neun)在各組小鼠大腦皮

6、層中的表達(dá)情況，每組每個(gè)時(shí)間點(diǎn)取5只，于處理完成后7天、14天、28天處死灌注取腦，進(jìn)行免疫組化試驗(yàn)。用病理圖文分析系統(tǒng)圖像處理軟件Image-Proplus6.0分析圖像，所得數(shù)據(jù)用SPSS21.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　結(jié)果:
　　1一般情況:實(shí)驗(yàn)組(TBI組及TBI+DC組)麻醉清醒后食欲下降，活動(dòng)減少，嗜睡，約1周后有所恢復(fù)，但較正常對(duì)照組差。正常對(duì)照組進(jìn)食水及精神狀況良好，活動(dòng)正常。
　　2行為學(xué)實(shí)驗(yàn)

7、>　　2.1神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分:NSS隨時(shí)間的變化趨勢(shì)三組不同，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)上兩兩分組比較，TBI組與TBI+DC組無(wú)明顯差異，但NSS均高于正常對(duì)照組。均數(shù)比較1h、24h、7d、14d、21d時(shí)TBI組＞TBI+DC組，28d時(shí)TBI組＜TBI+DC組。
　　2.2曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)
　　2.2.1總體平均速度:兩組間總體平均速度總體而言無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），TBI組實(shí)驗(yàn)處理后總體平均速度明顯下降，14天后有緩慢上升;TBI+D

8、C組實(shí)驗(yàn)處理后亦有下降，維持一段平臺(tái)期后，再次出現(xiàn)下降期。均數(shù)比較7d、14d、21d時(shí)TBI組＜TBI+DC組，28d時(shí)TBI組＞TBI+DC組。
　　2.2.2中央?yún)^(qū)活動(dòng)時(shí)間:兩組間中央?yún)^(qū)活動(dòng)時(shí)間總體而言無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），TBI組實(shí)驗(yàn)處理后中央?yún)^(qū)活動(dòng)時(shí)間明顯減少，21天后有小幅度增多;TBI+DC組實(shí)驗(yàn)處理后持續(xù)減少，前期均值高于TBI組，21天左右相交，后低于TBI組。
　　2.2.3四角活動(dòng)時(shí)間:兩組間四

9、角活動(dòng)時(shí)間總體而言無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)，TBI組實(shí)驗(yàn)處理后四角活動(dòng)時(shí)間明顯增多，14天后有所下降; TBI+DC組實(shí)驗(yàn)處理后持續(xù)上升，總體低于TBI組，14天后變化不大。均數(shù)比較7d、14d、21d時(shí)TBI組＞TBI+DC組，28d時(shí)TBI組＜TBI+DC組。
　　2.3高架十字迷宮
　　2.3.1(1)14天時(shí)進(jìn)臂總次數(shù):三組比較結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05），兩兩比較TBI組與TBI+DC組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0

10、.05)，進(jìn)臂總次數(shù)均較正常對(duì)照組明顯增多。(2)14天時(shí)開(kāi)臂進(jìn)入次數(shù):三組比較結(jié)果無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。(3)14天時(shí)閉臂進(jìn)入次數(shù):三組比較結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)，兩兩比較互不相同，進(jìn)入閉臂次數(shù)TBI組＞TBI+DC組＞CONTROL組。
　　2.3.2(1)28天時(shí)進(jìn)臂總次數(shù):三組比較結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05），兩兩比較TBI組與TBI+DC組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），進(jìn)臂總次數(shù)仍均高于正常對(duì)照組。

11、(2)28天時(shí)開(kāi)臂進(jìn)入次數(shù):三組比較結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），兩兩比較TBI組與正常對(duì)照組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05），進(jìn)入開(kāi)臂次數(shù)均高于TBI+DC組。(3)28天時(shí)閉臂進(jìn)入次數(shù):三組比較結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05），兩兩比較互不相同，進(jìn)入閉臂次數(shù)TBI+DC組＞TBI組＞CONTROL組。
　　2.4巴恩斯迷宮錯(cuò)誤次數(shù)及找到目標(biāo)所需時(shí)間:三組比較結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05），兩兩比較互不相同，錯(cuò)誤次數(shù)TBI+D

12、C組＞TBI組＞CONTROL組。
　　3干濕法:各組腦組織水分含量總體而言不同(P＜0.05），實(shí)驗(yàn)處理完成后
　　3天左右腦組織水分含量達(dá)最高峰，左側(cè)即創(chuàng)傷側(cè)腦組織TBI+DC組低于TBI組，右側(cè)二者差別不大。
　　4免疫組織化學(xué)(Immunohistochemistry，IHC)
　　4.1神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP):各組GFAP陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)總體而言不同(P＜0.05)，TBI組GFAP陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)7d＞

13、14d＞28d，TBI+DC組14d左右處于低峰，對(duì)照組隨時(shí)間變化不大。
　　4.2神經(jīng)元特異性核蛋白(Neun):各組Neun陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)總體而言不同(P＜0.05），TBI組及TBI+DC組Neun陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)均隨時(shí)間逐漸降低，7d時(shí)TBI+DC組＞TBI組，14d時(shí)二者范圍有重疊，28d時(shí)TBI組＞TBI+DC組;對(duì)照組隨時(shí)間變化不大。
　　結(jié)論:
　　1通過(guò)自由落體打擊模型可以成功建立TBI動(dòng)物模型來(lái)模擬TBI的病

14、理及行為學(xué)改變。
　　2 TBI明顯損害CD1小鼠的認(rèn)知能力及運(yùn)動(dòng)功能，DC在21d前能減輕上述損害，但28d時(shí)又出現(xiàn)損害加重。
　　3 TBI使CD1小鼠的焦慮水平明顯上升，14d時(shí)DC對(duì)焦慮起緩解作用，28d時(shí)又加劇焦慮。
　　428d時(shí)TBI及DC均損害CD1小鼠的空間記憶力。
　　5 TBI引起CD1小鼠明顯腦水腫，3d左右達(dá)高峰，DC可減輕腦水腫。
　　6 TBI引起CD1小鼠明顯大腦皮層炎癥反應(yīng)