磷霉素氨丁三醇散對(duì)慢性細(xì)菌性前列腺炎大鼠的治療作用及機(jī)制研究.pdf

1、研究背景：
　　慢性前列腺炎(chronic prostatitis，CP)是泌尿男科最常見(jiàn)的疾病之一，多見(jiàn)于成年男性，其發(fā)病率較高。大約50％的男性一生中的某個(gè)時(shí)刻均出現(xiàn)過(guò)前列腺炎的癥狀。CP病因復(fù)雜，遷延不愈，復(fù)發(fā)率高，主要表現(xiàn)為骨盆區(qū)域疼痛不適、排尿異常、性功能異常及全身癥狀等，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量。目前CP的病因及發(fā)病機(jī)制尚未完全明了，可能的發(fā)病原因及機(jī)制包括病原體感染、自身免疫異常、物理因素、化學(xué)因素、氧化應(yīng)激、尿液返

2、流、精神心理因素、神經(jīng)內(nèi)分泌因素等。CP發(fā)病機(jī)制多樣，目前多采用綜合療法治療。CP現(xiàn)有的治療藥物主要包括抗生素、α-受體阻滯劑、非甾體類抗炎鎮(zhèn)痛藥、植物制劑、中醫(yī)中藥等。其中抗生素主要以喹諾酮類、磺胺類、四環(huán)素類、大環(huán)內(nèi)酯類抗生素為主。
　　磷霉素(fosfomycin，F(xiàn)OM)相對(duì)分子質(zhì)量小，與血漿蛋白結(jié)合率低，吸收快，滲透性強(qiáng)，分布較廣泛，組織濃度在腎臟、膀胱、前列腺內(nèi)較高?？诜酌顾匕倍∪忌?fosfomycin trom

3、ethamine，F(xiàn)T)可以有效的預(yù)防經(jīng)尿道前列腺切除術(shù)后的細(xì)菌感染，并減少喹諾酮類抗生素的使用，使細(xì)菌對(duì)喹諾酮類抗生素的耐藥性減少。在經(jīng)直腸超聲引導(dǎo)的前列腺活檢中，F(xiàn)OM也可以作為術(shù)前預(yù)防用藥，可以有效預(yù)防術(shù)后尿路感染。此外，有報(bào)道顯示口服FOM可以在前列腺組織中達(dá)到有效的抑菌濃度。而FOM也成功治療過(guò)耐喹諾酮類抗生素的大腸埃希菌所致的前列腺膿腫患者。給予1例耐萬(wàn)古霉素腸球菌引起的前列腺炎患者口服FT也同樣獲得了滿意療效。
　　

4、白介素6（interleukin6，IL-6）、白介素8（interleukin8，IL-8）、腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factorα，TNF-α)等炎性細(xì)胞因子是由免疫細(xì)胞、炎癥細(xì)胞（如單核巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞等）分泌的、具有一定調(diào)控功能的生物活性蛋白多肽。它們可以通過(guò)自分泌、旁分泌等方式介導(dǎo)免疫細(xì)胞間的相互作用。CP患者的前列腺按摩液(expressed prostatic secretion，EPS)中可出現(xiàn)細(xì)

5、胞因子表達(dá)水平的變化，如IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-8、IL-10等細(xì)胞因子的異常，且這些細(xì)胞因子的表達(dá)水平與CP癥狀及治療反應(yīng)之間有一定的相關(guān)性，表明細(xì)胞因子參與了CP的發(fā)生發(fā)展，并為CP的免疫治療奠定一定的基礎(chǔ)。目前認(rèn)為，CP患者體內(nèi)抗炎與促炎細(xì)胞因子水平存在失衡，前列腺的炎癥是以細(xì)胞因子為中介產(chǎn)生的連鎖反應(yīng)。FOM除了具有直接殺滅細(xì)菌的作用，還具有抑制炎癥反應(yīng)、免疫調(diào)節(jié)等非殺菌作用。因此，本課題旨在利用大腸埃希菌誘導(dǎo)大

6、鼠慢性細(xì)菌性前列腺炎(chronic bacterial prostatitis，CBP)模型，并探討FT治療大鼠CBP的療效及可能作用機(jī)制。
　　目的：
　　1、給予SD大鼠經(jīng)尿道注入標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)控菌大腸埃希菌建立大鼠CBP模型，探討FT對(duì)CBP大鼠前列腺組織病理學(xué)的影響;
　　2、探討FT對(duì)CBP大鼠前列腺組織內(nèi)細(xì)菌含量的影響;
　　3、探討FT對(duì)CBP大鼠前列腺組織內(nèi)IL-6、IL-8、TNF-α表達(dá)水平的影響;

7、
　　4、通過(guò)以上研究，探討FT治療大鼠CBP的療效及其作用機(jī)制，為臨床上治療CBP奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)及提供理論依據(jù)。
　　方法：
　　將雄性SD大鼠隨機(jī)分為7組，每組10只。A組:空白對(duì)照組（假手術(shù)組）;B組:模型對(duì)照組;C組:陽(yáng)性對(duì)照組（左氧氟沙星組，100 mg/kg/d，30 d）;D組:FT低劑量組(200 mg/kg/d，14 d);E組:FT低劑量組(200 mg/kg/d，7 d);F組:FT高劑量組(300

8、 mg/kg/d，14 d);G組:FT高劑量組(300 mg/kg/d，7d)，各組均采用灌胃給藥。將SD大鼠稱重后，用乙醚麻醉。將提前配置好的細(xì)菌懸液0.2ml（細(xì)菌濃度1×108細(xì)胞/ml）經(jīng)導(dǎo)管緩慢注入尿道前列腺部，空白對(duì)照組以同樣方法注入0.2ml無(wú)菌生理鹽水，全程注意無(wú)菌操作。術(shù)后常規(guī)飼養(yǎng)4周。4周后確認(rèn)造模成功，按前述方法用藥。每組于末次給藥后，稱量，麻醉后切開(kāi)腹部，觀察前列腺組織外觀及粘連情況，于無(wú)菌冰冷的生理鹽水中剝離

9、前列腺，用濾紙吸干，稱重，記錄。取部分前列腺，制備前列腺病理組織切片，HE染色后鏡下觀察前列腺組織病理變化情況;取部分前列腺于無(wú)菌條件下制作10％的組織勻漿，采用連續(xù)倍比稀釋，涂平板菌落計(jì)數(shù)法計(jì)數(shù)各組大鼠前列腺組織中的細(xì)菌菌落數(shù);使用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)檢測(cè)各組大鼠前列腺組織勻漿中IL-6、IL-8、TNF-α表達(dá)水平的改變情況。
　　使用SPSS13.

10、0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量結(jié)果以x±SD表示，多個(gè)樣本均數(shù)比較先行方差齊性檢驗(yàn)，方差齊者組間比較使用One-Way ANOVA，方差不齊進(jìn)行秩和檢驗(yàn)，兩兩比較使用LSD檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1.SD大鼠一般情況
　　共造模大鼠60只，造模成功43只，成功率71.7％。因各種原因共排除大鼠17只。造模后A組（假手術(shù)組）大鼠一般狀況好，進(jìn)食、活動(dòng)正常，毛發(fā)有光澤;B組（模型組）大鼠表現(xiàn)出不同

11、程度的精神萎靡，懶動(dòng)，毛發(fā)無(wú)光澤凌亂，活動(dòng)減少，喜扎堆。陽(yáng)性對(duì)照組及FT治療組術(shù)后也表現(xiàn)出精神萎靡，懶動(dòng)，毛發(fā)無(wú)光澤凌亂，活動(dòng)減少，喜扎堆，但隨著藥物使用時(shí)間的延長(zhǎng)，大鼠狀況好轉(zhuǎn)，活動(dòng)逐漸增多，毛發(fā)恢復(fù)光澤。
　　2.各組大鼠前列腺情況
　　肉眼觀察A組大鼠前列腺色澤淡紅、腺體組織質(zhì)軟，有彈性，表面光滑無(wú)結(jié)節(jié)，與周圍其他組織無(wú)粘連，容易分離。B組大鼠前列腺色澤暗紅，欠光澤，質(zhì)地較硬或有結(jié)節(jié)，彈性差，個(gè)別前列腺有化膿，與周圍組

12、織有粘連。其余各組前列腺狀況介于A組與B組間。其中C、D、F組及G組前列腺腺體質(zhì)地較柔軟，有光澤，無(wú)結(jié)節(jié)、化膿，有彈性，與周圍組織無(wú)粘連;E組前列腺腺體與周圍組織有部分粘連，偶可觸及結(jié)節(jié)，彈性稍差。
　　3.各組大鼠前列腺組織病理學(xué)改變
　　A組大鼠前列腺組織結(jié)構(gòu)完整，腺上皮細(xì)胞排列整齊，腺腔內(nèi)可見(jiàn)較多染色為粉紅色的分泌物，間質(zhì)未見(jiàn)水腫，有少量纖維組織，偶見(jiàn)極少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn);B組大鼠前列腺腺腔狹窄，部分腺腔萎縮、閉塞，腺上

13、皮細(xì)胞有不同程度的破壞，腺腔內(nèi)分泌物明顯減少，間質(zhì)內(nèi)可見(jiàn)大量纖維組織增生，腺泡腔內(nèi)及組織間隙內(nèi)可見(jiàn)大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn);C組大鼠前列腺腺腔結(jié)構(gòu)基本完整，未見(jiàn)基底膜破壞，間質(zhì)內(nèi)纖維組織少量增生，可見(jiàn)少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn);D組大鼠前列腺腺腔結(jié)構(gòu)較完整，未見(jiàn)明顯破壞，間質(zhì)內(nèi)可見(jiàn)少量纖維組織增生及炎性細(xì)胞浸潤(rùn);E組大鼠前列腺局部組織結(jié)構(gòu)未見(jiàn)破壞，間質(zhì)及腺腔有中等量的纖維組織增生及炎性細(xì)胞浸潤(rùn);F組大鼠前列腺腺腔結(jié)構(gòu)較完整，未見(jiàn)基底膜破壞，間質(zhì)內(nèi)纖維組織

14、少量增生，可見(jiàn)少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn);G組大鼠前列腺腺腔結(jié)構(gòu)基本完整，未見(jiàn)基底膜破壞，間質(zhì)內(nèi)偶見(jiàn)纖維組織少量增生及炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。
　　4.各組大鼠前列腺組織中菌落計(jì)數(shù)情況
　　采用平板菌落計(jì)數(shù)法計(jì)數(shù)前列腺組織中的細(xì)菌含量，每塊組織按1g計(jì)算，求出樣品細(xì)菌總數(shù)，記為CFU/g，取對(duì)數(shù)值，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:與B組(模型組6.44±0.71)菌落計(jì)數(shù)相比，各組（C組2.77±0.84;D組2.97±0.73;E組3.20±0.62;F組2.

15、75±0.85; G組3.02±1.06）菌落計(jì)數(shù)均顯著減少(P＜0.01);與C組（陽(yáng)性對(duì)照組）菌落計(jì)數(shù)相比，E組菌落計(jì)數(shù)顯著增多（P＜0.01），其他各治療組菌落計(jì)數(shù)與C組比較均無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。
　　5.各組大鼠前列腺組織中IL-6、IL-8、TNF-α含量改變情況
　　ELISA測(cè)定結(jié)果顯示:與空白對(duì)照組比較，模型組大鼠前列腺組織勻漿中的IL-6、IL-8、TNF-α含量均明顯升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P

16、＜0.05或0.01）;與模型組比較，各治療組大鼠前列腺組織勻漿中的IL-8、TNF-α含量明顯降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05或0.01);各治療組大鼠前列腺組織勻漿的IL-6、IL-8、TNF-α含量與陽(yáng)性對(duì)照組比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);F組大鼠前列腺組織勻漿中的IL-6的表達(dá)量較模型組顯著減少(P＜0.05)，其余治療組及陽(yáng)性對(duì)照組前列腺組織勻漿中的IL-6的表達(dá)與模型組比較均無(wú)顯著性差異（P＞0.05），但較

17、模型組均有下降趨勢(shì)。
　　結(jié)論：
　　1、采用經(jīng)尿道插入PE10導(dǎo)管（插入深度約2.5 cm），并緩慢注入標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)控菌大腸埃希菌（濃度約1×108細(xì)胞/ml，0.2 ml）至尿道前列腺部，4周后大鼠CBP模型成功建立;
　　2、FT通過(guò)直接抑制前列腺內(nèi)細(xì)菌，可以達(dá)到治療大鼠CBP的目的;
　　3、FT通過(guò)抑制炎癥反應(yīng)等非殺菌作用抑制IL-6、IL-8、TNF-α的表達(dá)，減輕前列腺組織的炎癥反應(yīng)，修復(fù)破壞的組織結(jié)構(gòu)，