bFGF基因修飾的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在脊髓損傷動(dòng)物模型中bFGF表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、脊髓損傷常導(dǎo)致?lián)p傷平面以下感覺(jué)、運(yùn)動(dòng)功能不可逆、永久性喪失，給患者造成極大傷害，給家庭及社會(huì)造成極大負(fù)擔(dān)。中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)損傷后，軸突所處的微環(huán)境比軸突本身更影響其再生。細(xì)胞移植可替代丟失的神經(jīng)細(xì)胞，它分泌的各種神經(jīng)生長(zhǎng)因子可促進(jìn)軸突的再生，橋接神經(jīng)缺損后遺留的空隙，改善CNS的軸突再生環(huán)境，為軸突的生長(zhǎng)提供物理支架，符合聯(lián)合治療脊髓損傷理念，因此細(xì)胞移植成為目前脊髓損傷修復(fù)領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)。堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子bFGF(FGF-

2、2)(basic fibroblast growth factor)是FGF家族的成員之一，具有促血管形成、誘導(dǎo)胚胎發(fā)育、促進(jìn)神經(jīng)生長(zhǎng)等功能，bFGF在體內(nèi)分布廣泛，尤其是在神經(jīng)組織中含量豐富。目前已經(jīng)有大量的研究證實(shí)堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子對(duì)脊髓損傷(spinal cord injury SCI)的再生和修復(fù)具有重要作用，但由于急性脊髓損傷后bFGFR表達(dá)時(shí)程早于bFGF轉(zhuǎn)錄合成，因此限制了機(jī)體內(nèi)源性bFGF發(fā)揮保護(hù)缺血損傷神經(jīng)元的作用

3、，這提示治療脊髓損傷時(shí)需在bFGFR高表達(dá)時(shí)程提供足夠bFGF。而通過(guò)局部或全身給予外源性bFGF均難以達(dá)到理想的治療效果，本研究正是為解決這一問(wèn)題而作的基礎(chǔ)研究。將bFGF基因以質(zhì)粒pcDNA3.1為載體，通過(guò)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法導(dǎo)入骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)中，使外源bFGF基因能持續(xù)穩(wěn)定高表達(dá)，將基因修飾的細(xì)胞移植到損傷的脊髓中，使其在體內(nèi)合成分泌bFGF，這將可能為損傷脊髓及時(shí)提供足量bFGF，同時(shí)改善脊髓損傷局部微環(huán)境，為后續(xù)研究奠

4、定基礎(chǔ)。本文的研究?jī)?nèi)容主要包括以下三個(gè)部分： 1、用貼壁篩選法獲取高純度的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞； 2、將pcDNA3.1-bFGF質(zhì)粒通過(guò)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法導(dǎo)入骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞后檢測(cè)目的基因表達(dá)水平： 3、將基因修飾的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植到脊髓損傷動(dòng)物模型中，用免疫組化方法檢測(cè)基因組、空載體組、骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞組及培養(yǎng)基組在脊髓中bFGF的表達(dá)水平；應(yīng)用RT-PCR方法檢測(cè)外源基因bFGFmRNA的表達(dá)情況。 本研

5、究所取得的結(jié)果及結(jié)論： 1、通過(guò)貼壁篩選法可獲取高純度的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。 2、將pcDNA3.1-bFGF質(zhì)粒通過(guò)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法導(dǎo)入骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，目的基因在細(xì)胞中能有效表達(dá)。 3、將基因修飾的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植到脊髓后外源性bFGF基因能即時(shí)、持續(xù)、穩(wěn)定表達(dá)，極大提高bFGF的表達(dá)水平。 結(jié)論：(1)通過(guò)貼壁篩選法可以獲得高純度的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞；(2)將bFGF基因以pcDNA3.1為載體通過(guò)脂質(zhì)