大花金挖耳化學(xué)成分研究.pdf

1、天名精屬Carpesium是菊科(Asteraceae)旋覆花亞族Subtrib.Inulinae O.Hoffm.中的一屬，在全世界約有21種，主要分布在亞洲中部，在我國的西南山區(qū)尤為豐富。在中國、韓國和日本，該屬植物一直有民間藥用的記載?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究揭示了該屬植物具有抗腫瘤、抗炎、抗瘧原蟲以及抗真菌作用。前期化學(xué)成分研究發(fā)現(xiàn)該屬植物含有極其豐富的倍半萜類化合物。鑒于菊科植物中倍半萜內(nèi)酯二聚體(SequiterpeneLactone

2、 Dimers，SLDs)含量豐富，骨架多樣，連接方式多變，立體構(gòu)型復(fù)雜，全合成難度高以及細胞毒活性顯著的特點，我們旨在從菊科天名精屬植物中發(fā)現(xiàn)更多的新型SLDs，并對其進行深入的活性研究。天名精屬植物大花金挖耳Carpesiummacrocephalum主要分布于我國的甘肅、四川、東北等地，在韓國和日本也有分布，此前對大花金挖耳的化學(xué)成分研究較少且未見其生物活性研究。因此，本課題選取了采自吉林省通化市的大花金挖耳全草作為研究對象，對它

3、進行了較為系統(tǒng)的化學(xué)成分和生物活性研究。
　　一、化學(xué)成分研究
　　本論文對大花金挖耳全草的丙酮提取物運用正相、反相硅膠色譜、SephadexLH-20、制備薄層色譜、半制備HPLC柱色譜等技術(shù)從中分離得到了56個化合物。運用核磁共振(NMR)、高分辨質(zhì)譜(HR-ESI-MS)、紫外(UV)、紅外(IR)、圓二色譜(CD)、旋光(OR)、X-ray單晶衍射等光譜分析技術(shù)鑒定了這56個化合物，包括倍半萜類化合物42個、單萜類化

4、合物10個、二萜類化合物1個、黃酮類化合物2個、甾體類化合物1個，其中新化合物4個，包含3個新型SLDs（化合物1-3）和1個新型含氯的百里香酚類單萜（化合物6）。
　　從大花金挖耳中分離鑒定的3個新型SLDs按倍半萜單倍體的骨架類型可以被歸為桉烷-愈創(chuàng)木烷型。從生源合成途徑分析，它們可能源自于Diels-Alder[4+2](DA)環(huán)加成反應(yīng):由兩個不同的倍半萜內(nèi)酯片段通過兩根C-C單鍵相連而成，這在結(jié)構(gòu)上體現(xiàn)出區(qū)域選擇性（2，

5、4-/1，3-連接）與立體選擇性（exo/endo型）。在結(jié)構(gòu)鑒定方面，SLDs的結(jié)構(gòu)解析重點和難點在于它們的exo/endo構(gòu)型和2，4-/1，3-連接的確定上。通過觀察兩個倍半萜片段自身和相互之間的NOESY相關(guān)，及運用本組總結(jié)的兩個波譜特征(即特征的Ha-2'/Ha-3'的化學(xué)位移與正/反Cotton effect)，確定了3個新型SLDs全部為exo型;通過觀察1H-1H COSY、HSQC和HMBC相關(guān)，確定其連接方式為1，3

6、-連接（SLDs1和3）和2，4-連接(SLD2);此外，SLD1還通過Cu-Kα-X-ray單晶衍射方法進一步確證了其絕對構(gòu)型。
　　二、生物活性研究
　　采用MTT法對從大花金挖耳中分離鑒定的新型SLDs及它們可能的生源合成前體進行了細胞毒活性篩選，結(jié)果顯示SLD1對4種人體腫瘤細胞株[A549（人肺腺癌細胞）、HCT116（人結(jié)腸癌細胞）、MDA-MB-231（人乳腺癌細胞）以及BEL7404（人肝癌細胞）]均有較強的

7、細胞增殖抑制作用（IC50分別為2.04、2.27、5.17、3.77μM），且SLD1的細胞毒活性明顯強于其相對應(yīng)的生源合成前體;SLD2對HCT116細胞具有較強的抑制作用（IC50為3.30μM），對MDA-MB-231和BEL7404細胞有一定的抑制作用（IC50為15.68和11.62μM），且該化合物的抑制作用明顯強于其相對應(yīng)的倍半萜單倍體前體;SLD3對4種癌細胞均無明顯的細胞毒活性，而其相對應(yīng)的生源合成前體對上述4種癌細

8、胞均有較強的細胞毒活性。
　　接下來本課題采用Western Blot方法檢測這3個新型SLDs對小鼠微血管內(nèi)皮細胞(bEnd.3)內(nèi)NF-κB通路中P65、p-P65、IκBα、p-IκBα四種蛋白調(diào)控的影響。實驗結(jié)果顯示，在10μM的劑量下SLDs1和2能夠明顯的下調(diào)P65亞單元的磷酸化以及抑制IκBα亞單元的降解，而SLD3的調(diào)控作用不明顯。
　　通過以上實驗我們僅可以初步推斷exo型SLDs的細胞毒活性可能是作用于N